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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 目的蛋白分泌到了周质中怎样才能让它主要存在于细胞外的培养基中
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honger982896

银虫 (初入文坛)

[交流] 目的蛋白分泌到了周质中怎样才能让它主要存在于细胞外的培养基中

如题，有好的方法或建议请赐教！！
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1楼 2008-08-25 22:00:04
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zxy71723

铜虫 (小有名气)
搭车同问，谢谢
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2楼2008-08-26 15:57:35
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yqhc

金虫 (小有名气)
培养结束，离心培养液，利用某些缓冲液（PB）再溶解，目的蛋白基本可以转移到溶液中。
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3楼2008-08-26 17:01:23
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playboy723

金虫 (正式写手)
目的蛋白加了信号肽了？
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4楼2008-08-26 22:03:30
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zxy71723

铜虫 (小有名气)
培养结束，离心培养液，利用某些缓冲液（PB）再溶解，目的蛋白基本可以转移到溶液中?
这样就能使从目的蛋白从周质转移到培养基中了么？？？
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5楼2008-08-27 09:56:50
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lliu

新虫 (小有名气)
★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
经典文献中是选用蔗糖渗透法，但我试过几次，效果不好（产量低）。我们这里通用的方法如下：

离心回收你的细胞，溶解在适量的PBS或其他Buffer中（OD600=10左右即可）。

1。Freeze/Thaw法：液氮5分钟，37C10分钟，反复5次。离心取上清。
或者
2。Promega公司的FastBreak效果也不错。
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6楼2008-08-28 03:20:50
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honger982896

银虫 (初入文坛)
★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):积极交流
离心回收你的细胞，溶解在适量的PBS或其他Buffer中（OD600=10左右即可）。

1。Freeze/Thaw法：液氮5分钟，37C10分钟，反复5次。离心取上清。
或者
2。Promega公司的FastBreak效果也不错。
感谢回复，蔗糖渗透法我也做了，效果也不是很好。我的目的是让周质的蛋白进入到培养液中这样周质中还能源源不断的产生蛋白，从而提高表达量，我试过溶菌酶，效果也不好，各位大侠还有别的法子没？？
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7楼2008-09-01 08:13:29
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xyfu

金虫 (小有名气)
我以前曾实现在发酵过程中将在胞质内表达的硫氧还融合蛋白释放至培养基中，后来发现这种方法也适用于释放一些分泌至周质的重组蛋白。建议你试一试。可以参考我的文章：Extracellular production of human parathyroid hormone as a thioredoxin fusion form in Escherichia coli by chemical permeabilization combined with heat treatment. Biotechnology Progress, 2005, 21 (5): 1429 -1435.
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8楼2008-09-04 21:47:31
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