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honger982896

银虫 (初入文坛)

[交流] 目的蛋白分泌到了周质中怎样才能让它主要存在于细胞外的培养基中

如题,有好的方法或建议请赐教!!
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lliu

新虫 (小有名气)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
经典文献中是选用蔗糖渗透法,但我试过几次,效果不好(产量低)。我们这里通用的方法如下:

离心回收你的细胞,溶解在适量的PBS或其他Buffer中(OD600=10左右即可)。

1。Freeze/Thaw法:液氮5分钟,37C10分钟,反复5次。离心取上清。
或者
2。Promega公司的FastBreak效果也不错。
6楼2008-08-28 03:20:50
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zxy71723

铜虫 (小有名气)

搭车同问,谢谢
2楼2008-08-26 15:57:35
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yqhc

金虫 (小有名气)

培养结束,离心培养液,利用某些缓冲液(PB)再溶解,目的蛋白基本可以转移到溶液中。
3楼2008-08-26 17:01:23
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playboy723

金虫 (正式写手)

目的蛋白加了信号肽了?
4楼2008-08-26 22:03:30
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