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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 生物效应评价 » PAMAM类似的denderimer载吸附基因后转染问题
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704361326

金虫 (正式写手)

恩恩

[求助] PAMAM类似的denderimer载吸附基因后转染问题已有2人参与

本人合成一种新的材料，大体和PAMAM类似。做过了琼脂糖实验，可以吸附基因；也做了肝素提取实验和RNase抗降解实验，结果都可以。
转染进入细胞失败。
重复n多次了，对照品lipo可以转进去，但自己的材料携带基因后转不进细胞（A549，293T都试过）.
求高手指点！
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踏踏实实地走好自己的路
1楼2015-09-01 15:22:42
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704361326

金虫 (正式写手)

恩恩
自己先顶一下。
求制剂做基因的同行们指导指导。
不胜感激！
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踏踏实实地走好自己的路
2楼2015-09-01 15:24:04
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hsingyu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
markar: 金币+1, 好专业，不明觉厉！ 2015-09-04 21:44:15
704361326: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-09-06 20:38:19
你要知道PAMAM本身的基因转染能力也是比较差的，你的材料和PAMAM类似，类似于PEI？就算是PEI以我们的标准也是差的。所以你没转出来一点都不奇怪。随便合成一个分子效果都很好的话，人家Lipo2000能卖这么贵？
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做最好的自己~
3楼2015-09-02 12:32:32
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ybrjack

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
markar: 金币+1, 不懂，顶一下！ 2015-09-04 21:44:31
704361326: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-09-06 20:42:16
电位，要20mV，结合DNA粒径200nm一下，是不是材料太毒了？还是N\P太低了？

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4楼2015-09-02 23:55:43
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704361326

金虫 (正式写手)

恩恩
引用回帖:
3楼: Originally posted by hsingyu at 2015-09-02 12:32:32
你要知道PAMAM本身的基因转染能力也是比较差的，你的材料和PAMAM类似，类似于PEI？就算是PEI以我们的标准也是差的。所以你没转出来一点都不奇怪。随便合成一个分子效果都很好的话，人家Lipo2000能卖这么贵？

这样啊。
你以前做过PEI吗？它的转染效率怎么样？
我不求多，50-70%都行。可我现在做的10%都不到啊
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踏踏实实地走好自己的路
5楼2015-09-06 20:40:23
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704361326

金虫 (正式写手)

恩恩
引用回帖:
3楼: Originally posted by hsingyu at 2015-09-02 12:32:32
你要知道PAMAM本身的基因转染能力也是比较差的，你的材料和PAMAM类似，类似于PEI？就算是PEI以我们的标准也是差的。所以你没转出来一点都不奇怪。随便合成一个分子效果都很好的话，人家Lipo2000能卖这么贵？

你有好的意见或建议吗？
我现在材料没法改，只能接着做的。。。
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踏踏实实地走好自己的路
6楼2015-09-06 20:41:26
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704361326

金虫 (正式写手)

恩恩
引用回帖:
4楼: Originally posted by ybrjack at 2015-09-02 23:55:43
电位，要20mV，结合DNA粒径200nm一下，是不是材料太毒了？还是N\P太低了？

谢谢您的回答！
材料毒性不大，远小于lipo，N/P比筛了很多，有转进去的，转染效率低，最高的不超过10%。
关于电位和粒径，我想问您一下：
如果要测电位和粒径，DNA浓度达到多少合适？我的基因是买的，不敢多用啊。。。。
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踏踏实实地走好自己的路
7楼2015-09-06 20:45:35
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704361326

金虫 (正式写手)

恩恩
引用回帖:
3楼: Originally posted by hsingyu at 2015-09-02 12:32:32
你要知道PAMAM本身的基因转染能力也是比较差的，你的材料和PAMAM类似，类似于PEI？就算是PEI以我们的标准也是差的。所以你没转出来一点都不奇怪。随便合成一个分子效果都很好的话，人家Lipo2000能卖这么贵？

PEI转染效率本身就低吗？PEI是两亲性的吗？
一般转染效率能达到多少？
我的是PAMAM类似物。
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踏踏实实地走好自己的路
8楼2015-09-06 20:53:01
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ybrjack

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 704361326 at 2015-09-06 20:45:35
谢谢您的回答！
材料毒性不大，远小于lipo，N/P比筛了很多，有转进去的，转染效率低，最高的不超过10%。
关于电位和粒径，我想问您一下：
如果要测电位和粒径，DNA浓度达到多少合适？我的基因是买的，不敢多用啊 ...

比转染低～具体看文献吧…

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9楼2015-09-07 00:33:37
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hsingyu

木虫 (正式写手)
你转的是EGFP？还是Luciferase？大质粒相对难转，说不定换个小一点的就会好一点。材料有时候不行就是不行。没办法的。
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做最好的自己~
10楼2015-09-07 16:45:58
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