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cq_noah

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[求助] 高质量总RNA提取已有1人参与

用TRIzol对总RNA进行提取，最后一步，在55-60度的水中孵育10-15分钟，这一步的目的是干什么啊？

我的目的是做RNA提取的质控，所以我要保证高质量的提取总RNA，也就是尽量避免RNA的降解，55度会不会导致RNA物理性的断裂？

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1楼 2015-09-01 14:21:41

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evangelina

无虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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cq_noah: 金币+20, ★★★很有帮助, 我觉得影响还是挺大的，因为大多数情况大家提RNA后就逆转了，如果跑个胶或者做个毛细管电泳，降解还是挺明显的，只是部分RNA降解对于RT-PCR影响并不是很大， 2015-09-02 14:36:43

让RNA完全并均匀的溶解在水里面。只要你的管子和水都是RNAse Free，操作够干净的话，就不怕降解。
55度15分钟一般不会造成RNA断裂，不过不要太长，例如超过半小时就不太好。
这一步很重要的，不做好的话RNA浓度会很低，因为没有充分溶解。
最好这十五分钟内，每隔五分钟用手指轻轻弹几下管子，促进RNA溶解。