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Tama二等兵

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于同源重组 已有5人参与

谁能告诉我同源重组的反应温度为什么是50度,各种酶是怎么作用的,或者哪本参考书可以给我解答
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Tama二等兵

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by jindiao at 2015-09-10 09:27:03
是同源重组机理,但是是三个酶,不是一个酶,与好多同源重组试剂盒不一样的是,Gibson assembly可以在体外形成闭合环状DNA,这点和传统的连接比较像。
稍微具体的原理是:
核酸外切酶(最适温度在37°左右)从各 ...

您是指的不依赖连接的克隆是么?OVERLAP利用T4聚合酶消化出两条互补的单链,配对后利用taq酶扩增补足缺失部分,最后经连接酶形成磷酸二酯键,对于非同源序列,利用大肠杆菌聚合酶1的klenow大片段切掉环状质粒上的单链帽结构是么?谢谢您的帮助,刚接触质粒连接不久,之前我一直把它理解为同源重组,因为boss们称这段overlap为重组臂,之后发觉不太对,因为overlap有时候会有缺失,那么说这种重组本质还是连接是么?
10楼2015-09-10 19:29:51
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迷迭的微笑

新虫 (初入文坛)

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有这种说法吗?你在哪看到的啊?你做的哪方面啊?
2楼2015-08-29 20:15:23
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仇峰12306

铁虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
应该不是确定的50℃吧,我也不确定
3楼2015-08-29 21:12:21
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jindiao

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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Tama二等兵: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-08-31 20:52:40
楼主说的是体外同源重组Gibson assembly实验条件吧?
简单来讲,这是位于Venter Institute的Gibson博士开发的一种体外同源重组技术,用于合成和获得大片段DNA的方法。具体原理请参见http://www.nature.com/nmeth/journal/v6/n5/full/nmeth.1318.html
文献名:Enzymatic assembly of DNA molecules up to several hundred kilobases
4楼2015-08-30 08:23:22
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