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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 真菌DNA提取疑难
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come on-m

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌DNA提取疑难 已有5人参与

土壤采自一个月前，保存在-20°冰箱用于土壤真菌DNA的提取，完全按照试剂盒步骤进行，但经提取电泳后，无条带或有一整条的不明显拖尾，求解原因何在？新手一枚，还请大家相助，感谢感谢！
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1楼 2015-08-27 16:05:40
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

章旺希冀

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
come on-m: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-08-27 20:09:45
首先试剂盒提取不一定最好，有时候便宜的试剂盒还不如自己配制的药品好使，其次，电泳检测无条带不代表没有提取成功，只是DNA量比较小，可以通过DNA检测浓度的仪器，看看浓度够不够，不检测也可以试着PCR扩增一下，检测时的拖带可能是引物二聚体什么的，总之可以先试着跑一下pcr，希望建议对你有帮助，祝你实验成功
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2楼2015-08-27 17:17:29
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yuyue7176

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
come on-m: 金币+2, ★有帮助 2015-08-28 17:13:19
楼上说的很详细，我这个暑假提了不下20次的真菌DNA有的出条带了，有的很弱，有的压根就没有，但这些都不代表你提取的成功与否，你可以加引物，pcr扩增下，扩增后的再跑电泳，一般在500bp的位置会有条带了
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3楼2015-08-28 09:10:15
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匿名

木虫 (著名写手)

无敌小木虫
本帖仅楼主可见
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12楼2015-08-31 17:57:49
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come on-m

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuyue7176 at 2015-08-28 09:10:15
楼上说的很详细，我这个暑假提了不下20次的真菌DNA有的出条带了，有的很弱，有的压根就没有，但这些都不代表你提取的成功与否，你可以加引物，pcr扩增下，扩增后的再跑电泳，一般在500bp的位置会有条带了

好的，感谢感谢哈！！
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4楼2015-08-28 17:12:19
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boy2006

木虫 (小有名气)
有点想不明白，楼主为什么单独提取土壤真菌DNA，而不是提取土壤整个微生物总DNA，这样是为了单独做真菌方便，减少细菌DNA的干扰吗？
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5楼2015-08-31 08:53:27
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生态学查建军

金虫 (小有名气)
感谢楼主的提问，我遇到了相似的问题，哈哈哈
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6楼2015-08-31 09:16:05
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fengjunchen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
come on-m: 金币+1, ★有帮助 2015-08-31 13:35:39
做环境的同胞哈！如果只是做多样性pcr出16s的话，提取dna看看吸光度比值直接p就好。如果是要求完整性的提取，拖尾就是有降解或者物理性的断裂，说明提取方法或操作手法需要改进。

发自小木虫Android客户端
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7楼2015-08-31 10:04:38
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come on-m

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by boy2006 at 2015-08-31 08:53:27
有点想不明白，楼主为什么单独提取土壤真菌DNA，而不是提取土壤整个微生物总DNA，这样是为了单独做真菌方便，减少细菌DNA的干扰吗？

嗯，只是做真菌，最后进行鉴定
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8楼2015-08-31 13:32:42
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come on-m

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 生态学查建军 at 2015-08-31 09:16:05
感谢楼主的提问，我遇到了相似的问题，哈哈哈

，那你现在提的怎么样了？
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9楼2015-08-31 13:33:45
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come on-m

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by fengjunchen at 2015-08-31 10:04:38
做环境的同胞哈！如果只是做多样性pcr出16s的话，提取dna看看吸光度比值直接p就好。如果是要求完整性的提取，拖尾就是有降解或者物理性的断裂，说明提取方法或操作手法需要改进。
...

好的，非常感谢哈！！
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10楼2015-08-31 13:35:27
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