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come on-m

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌DNA提取疑难 已有5人参与

土壤采自一个月前,保存在-20°冰箱用于土壤真菌DNA的提取,完全按照试剂盒步骤进行,但经提取电泳后,无条带或有一整条的不明显拖尾,求解原因何在?新手一枚,还请大家相助,感谢感谢!
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章旺希冀

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
come on-m: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-08-27 20:09:45
首先试剂盒提取不一定最好,有时候便宜的试剂盒还不如自己配制的药品好使,其次,电泳检测无条带不代表没有提取成功,只是DNA量比较小,可以通过DNA检测浓度的仪器,看看浓度够不够,不检测也可以试着PCR扩增一下,检测时的拖带可能是引物二聚体什么的,总之可以先试着跑一下pcr,希望建议对你有帮助,祝你实验成功
2楼2015-08-27 17:17:29
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yuyue7176

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
come on-m: 金币+2, 有帮助 2015-08-28 17:13:19
楼上说的很详细,我这个暑假提了不下20次的真菌DNA有的出条带了,有的很弱,有的压根就没有,但这些都不代表你提取的成功与否,你可以加引物,pcr扩增下,扩增后的再跑电泳,一般在500bp的位置会有条带了
3楼2015-08-28 09:10:15
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匿名

木虫 (著名写手)

无敌小木虫

本帖仅楼主可见
12楼2015-08-31 17:57:49
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come on-m

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yuyue7176 at 2015-08-28 09:10:15
楼上说的很详细,我这个暑假提了不下20次的真菌DNA有的出条带了,有的很弱,有的压根就没有,但这些都不代表你提取的成功与否,你可以加引物,pcr扩增下,扩增后的再跑电泳,一般在500bp的位置会有条带了

好的,感谢感谢哈!!
4楼2015-08-28 17:12:19
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boy2006

木虫 (小有名气)

有点想不明白,楼主为什么单独提取土壤真菌DNA,而不是提取土壤整个微生物总DNA,这样是为了单独做真菌方便,减少细菌DNA的干扰吗?
5楼2015-08-31 08:53:27
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生态学查建军

金虫 (小有名气)

感谢楼主的提问,我遇到了相似的问题,哈哈哈
6楼2015-08-31 09:16:05
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fengjunchen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


come on-m: 金币+1, 有帮助 2015-08-31 13:35:39
做环境的同胞哈!如果只是做多样性pcr出16s的话,提取dna看看吸光度比值直接p就好。如果是要求完整性的提取,拖尾就是有降解或者物理性的断裂,说明提取方法或操作手法需要改进。

发自小木虫Android客户端
7楼2015-08-31 10:04:38
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come on-m

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by boy2006 at 2015-08-31 08:53:27
有点想不明白,楼主为什么单独提取土壤真菌DNA,而不是提取土壤整个微生物总DNA,这样是为了单独做真菌方便,减少细菌DNA的干扰吗?

嗯,只是做真菌,最后进行鉴定
8楼2015-08-31 13:32:42
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come on-m

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 生态学查建军 at 2015-08-31 09:16:05
感谢楼主的提问,我遇到了相似的问题,哈哈哈

,那你现在提的怎么样了?
9楼2015-08-31 13:33:45
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come on-m

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by fengjunchen at 2015-08-31 10:04:38
做环境的同胞哈!如果只是做多样性pcr出16s的话,提取dna看看吸光度比值直接p就好。如果是要求完整性的提取,拖尾就是有降解或者物理性的断裂,说明提取方法或操作手法需要改进。
...

好的,非常感谢哈!!
10楼2015-08-31 13:35:27
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