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跪求大神指点关于ppic9k载体在酵母中表达 已有3人参与
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各位大神好，本人分子生物小菜鸟一个。想请教一下关于蛋白用ppic9k这个载体在毕赤酵母中表达方面的知识。 之前我用Bgl2这个酶线性化，毕赤酵母表达手册里面说用这个酶线性化之后电转化酵母得到的是Mut+表型，提取酵母基因组鉴定，用AOX1通用引物时理论上应该能得到两个条带，一个是完整的AOX1基因片段，一个是目的基因片段加上470bp，我的目的基因是500bp左右，因此还有一条条带应该是1000bp左右。结果我的电泳结果显示只有一条1000bp左右的条带，这正常吗？这是为什么呢？ 然后我再用目的片段的特异性引物做的验证，电泳结果有一条很目的片段大小差不多的500bp左右的条带。这样我能接着往下进行试验吗？这个现象好像是Muts表型啊。听说Muts表型表达比较慢，是有多慢呢？ 问题有点蠢，希望大神多多包涵！ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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你好！请问你也是做9k表达的吗？我看了文献说mut+表型的是有两条条带的，所以我现在怀疑是不是我9k质粒上的aox1这个启动子被破坏了，所以很难诱导出蛋白来，好烦恼！ 发自小木虫IOS客户端 |
12楼2015-11-13 11:05:08
2楼2015-08-26 17:59:33
4楼2015-08-27 15:34:22
halfbeer
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- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2015-09-07 08:26:26