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xiao杉儿

金虫 (小有名气)

[求助] 肝微粒体实验中代谢稳定性问题 已有3人参与

恳请各位大神帮帮忙!!
本人现在在做一个单一成分的肝微粒体体外代谢实验
情况一:孵育时间考察中,发现其代谢稳定性很乱,用大鼠肝微粒体做,底物浓度(20uM),蛋白浓度0.5 mg/ml,设0-120min的孵育时间,最终有时能降20~30%,有时又只有百分之几的变化,且中间有的点不降反增。
情况二:选了某次稳定性实验中代谢了15%的时间点(30min),蛋白浓度(0.75mg/ml,已考察)做底物浓度的考察,发现中间仍有某些点没有规律性的变化,但各浓度点有代谢30~40%,排除这些点后总体的代谢速率在上升,且呈线性。
情况三:选用上述在线性范围内的某底物浓度(60uM),再次用大鼠肝微粒体做代谢稳定性实验,发现代谢依然不稳定,重做,在60min时也只有百分之几的代谢。
现在实验一直停滞不前了,按筛选出的条件做得不到前面实验的结果(如与孵育时间和底物浓度实验代谢情况比 ),请各位大神不吝赐教,谢谢!!!!
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taxue314

新虫 (初入文坛)

你做的是一相代谢还是二相代谢
2楼2015-09-07 17:18:36
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nana9007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感觉底物浓度有点高,你降低试试看吧
3楼2015-09-11 10:23:27
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xiao杉儿

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by taxue314 at 2015-09-07 17:18:36
你做的是一相代谢还是二相代谢

做的一相代谢
4楼2015-09-14 20:04:13
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xiao杉儿

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by nana9007 at 2015-09-11 10:23:27
感觉底物浓度有点高,你降低试试看吧

不好意思,我没有表达清楚,这里的底物浓度指的是初始浓度,她的孵育浓度是0.2 uM、0.6 uM等
5楼2015-09-14 20:05:37
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左非非考复旦

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是不是因为你的化合物在孵育条件下不稳定啊?发生了降解,或者别的啥的
不抛弃不放弃
6楼2015-10-26 14:36:25
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xiao杉儿

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 左非非考复旦 at 2015-10-26 14:36:25
是不是因为你的化合物在孵育条件下不稳定啊?发生了降解,或者别的啥的

应该不是,做了后期实验证明它主要是由二相代谢
很感谢虫友的帮助哈~~~
7楼2015-10-26 21:36:31
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llw1986

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by xiao杉儿 at 2015-10-26 21:36:31
应该不是,做了后期实验证明它主要是由二相代谢
很感谢虫友的帮助哈~~~...

不好意思,我想问下你的化合物既然是二相代谢反应为什么加一相代谢反应的启动剂会有消耗?

发自小木虫IOS客户端
8楼2016-05-20 17:02:09
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A奇点

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xiao杉儿 at 2015-10-26 21:36:31
应该不是,做了后期实验证明它主要是由二相代谢
很感谢虫友的帮助哈~~~...

我想问一下,肝微粒体孵育的转速应该设置多少啊?谢谢啦

发自小木虫Android客户端
9楼2019-04-03 14:40:05
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A奇点

新虫 (小有名气)

我想问一下你的NADPH启动系统是怎么配制的?我用NADPH的四钠盐直接配制的?还要加其他东西吗?

发自小木虫Android客户端
10楼2019-06-24 11:11:50
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