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xiao杉儿

金虫 (小有名气)

[求助] 肝微粒体实验中代谢稳定性问题 已有3人参与

恳请各位大神帮帮忙!!
本人现在在做一个单一成分的肝微粒体体外代谢实验
情况一:孵育时间考察中,发现其代谢稳定性很乱,用大鼠肝微粒体做,底物浓度(20uM),蛋白浓度0.5 mg/ml,设0-120min的孵育时间,最终有时能降20~30%,有时又只有百分之几的变化,且中间有的点不降反增。
情况二:选了某次稳定性实验中代谢了15%的时间点(30min),蛋白浓度(0.75mg/ml,已考察)做底物浓度的考察,发现中间仍有某些点没有规律性的变化,但各浓度点有代谢30~40%,排除这些点后总体的代谢速率在上升,且呈线性。
情况三:选用上述在线性范围内的某底物浓度(60uM),再次用大鼠肝微粒体做代谢稳定性实验,发现代谢依然不稳定,重做,在60min时也只有百分之几的代谢。
现在实验一直停滞不前了,按筛选出的条件做得不到前面实验的结果(如与孵育时间和底物浓度实验代谢情况比 ),请各位大神不吝赐教,谢谢!!!!
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nana9007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感觉底物浓度有点高,你降低试试看吧
3楼2015-09-11 10:23:27
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taxue314

新虫 (初入文坛)

你做的是一相代谢还是二相代谢
2楼2015-09-07 17:18:36
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xiao杉儿

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by taxue314 at 2015-09-07 17:18:36
你做的是一相代谢还是二相代谢

做的一相代谢
4楼2015-09-14 20:04:13
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xiao杉儿

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by nana9007 at 2015-09-11 10:23:27
感觉底物浓度有点高,你降低试试看吧

不好意思,我没有表达清楚,这里的底物浓度指的是初始浓度,她的孵育浓度是0.2 uM、0.6 uM等
5楼2015-09-14 20:05:37
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