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zjy000999

新虫 (初入文坛)

[求助] 【新手求助】RNA纯度低对接下来反转录、real-time PCR影响大吗?有什么补救方法吗? 已有1人参与

细胞沉淀用TRIZol法提的,目的是看一下瞬转是否成功效率如何。纯度不高,A260/280分别为1.44、1.65、1.67、1.94。下一步计划是做反转录,real-time PCR,不需要很精确,只想大概知道转染成功与否。请问这样影响大吗?或者有什么补救的方法,因为重提涉及很多麻烦的东西。谢谢大神指导!

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ljq1027

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zjy000999 at 2015-08-26 10:18:09
我继续之前实验,引物都是师兄设计好的~只想知道这种纯度能否做反转录
...

你们使用特异引物进行第一链合成啊?其实还是推荐你重新提。如果继续做的话其实没有必要做qPCR,做个普通PCR看有没有就可以了。
无可奈何花落去,似曾相识燕归来~
9楼2015-08-26 10:27:36
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ljq1027

金虫 (小有名气)

如果转染的基因和细胞不是同一个种属的话,这个可以用来确定转染是否成功。但是要确定效率的话,涉及到定量了,只能重提RNA了。
无可奈何花落去,似曾相识燕归来~
2楼2015-08-26 00:34:29
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zjy000999

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ljq1027 at 2015-08-26 00:34:29
如果转染的基因和细胞不是同一个种属的话,这个可以用来确定转染是否成功。但是要确定效率的话,涉及到定量了,只能重提RNA了。

转的是mirna呢?

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3楼2015-08-26 06:23:17
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zjy000999

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ljq1027 at 2015-08-26 00:34:29
如果转染的基因和细胞不是同一个种属的话,这个可以用来确定转染是否成功。但是要确定效率的话,涉及到定量了,只能重提RNA了。

多谢回答!补充一下,转的是MiRNA,只想初步地定性地看一下转染是否成功,不需要定量效率~这种情况呢?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2015-08-26 06:35:23
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