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zjy000999

新虫 (初入文坛)

[求助] 【新手求助】RNA纯度低对接下来反转录、real-time PCR影响大吗？有什么补救方法吗？ 已有1人参与

细胞沉淀用TRIZol法提的，目的是看一下瞬转是否成功效率如何。纯度不高，A260/280分别为1.44、1.65、1.67、1.94。下一步计划是做反转录，real-time PCR，不需要很精确，只想大概知道转染成功与否。请问这样影响大吗？或者有什么补救的方法，因为重提涉及很多麻烦的东西。谢谢大神指导！

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1楼 2015-08-25 23:51:56
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zjy000999

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ljq1027 at 2015-08-26 00:34:29
如果转染的基因和细胞不是同一个种属的话，这个可以用来确定转染是否成功。但是要确定效率的话，涉及到定量了，只能重提RNA了。

多谢回答！补充一下，转的是MiRNA，只想初步地定性地看一下转染是否成功，不需要定量效率~这种情况呢？

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4楼2015-08-26 06:35:23
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ljq1027

金虫 (小有名气)
如果转染的基因和细胞不是同一个种属的话，这个可以用来确定转染是否成功。但是要确定效率的话，涉及到定量了，只能重提RNA了。
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无可奈何花落去，似曾相识燕归来~
2楼2015-08-26 00:34:29
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zjy000999

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ljq1027 at 2015-08-26 00:34:29
如果转染的基因和细胞不是同一个种属的话，这个可以用来确定转染是否成功。但是要确定效率的话，涉及到定量了，只能重提RNA了。

转的是mirna呢？

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3楼2015-08-26 06:23:17
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ljq1027

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zjy000999 at 2015-08-26 06:35:23
多谢回答！补充一下，转的是MiRNA，只想初步地定性地看一下转染是否成功，不需要定量效率~这种情况呢？
...

如果转的是miRNA，当时为什么不用偶联荧光基团的RNA确定是否能转染成功呢。而且你做qPCR想P的是作用的目标基因？
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无可奈何花落去，似曾相识燕归来~
5楼2015-08-26 09:17:19
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