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骚年的奋斗

新虫 (小有名气)

[求助] 细胞培养方面的问题 已有1人参与

本人刚刚开始养细胞,细胞是MEF,今天晚上打算传代,用胰消化酶处理时发现有很多的细胞未被消化下来,仍然待在培养皿壁上,但是细胞形状已经由梭形变成椭圆形,我又加了点胰酶并且增长了消化时间,但这些细胞仍然下不来,以前传代没有发生这种情况,这到底是什么情况?大家有了解的吗?求助求助求助。。。。
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骚年的奋斗

新虫 (小有名气)

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引用回帖:
2楼: Originally posted by smilingworld at 2015-08-27 10:37:52
胰酶的浓度是0.25%么?加点EDTA试试,还有MEF一般传代8回。要是在8代以内,细胞变圆,个人感觉应该不是变异啥的,就是细胞应该没问题。

今天又传了一次,结果仍然有很多细胞消化不下来(虽然细胞变圆了,但仍然贴在壁上),我的这个细胞传代已经超过八代了,是不是传代次数多了就会这样。
保持清醒
3楼2015-08-27 17:25:33
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smilingworld

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
胰酶的浓度是0.25%么?加点EDTA试试,还有MEF一般传代8回。要是在8代以内,细胞变圆,个人感觉应该不是变异啥的,就是细胞应该没问题。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2015-08-27 10:37:52
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smilingworld

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 骚年的奋斗 at 2015-08-27 17:25:33
今天又传了一次,结果仍然有很多细胞消化不下来(虽然细胞变圆了,但仍然贴在壁上),我的这个细胞传代已经超过八代了,是不是传代次数多了就会这样。...

只能说传代次数多了,有可能会这样,最好是8代以内。建议楼主换一管新的,就是从零下200度(也有保存在零下80度的,取决于保存液体的不同)的环境里刚拿出来的那种,等着爬满flask的壁了,在显微镜下好好观察,毕竟刚开始,多下一些功夫,加油。还有要注意,传代的时候一定不要被污染到(污染后的,营养液会变浑浊,细胞会死掉,形态残缺,漂浮起来)。
4楼2015-08-27 19:04:54
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