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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 细胞培养方面的问题
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骚年的奋斗

新虫 (小有名气)

[求助] 细胞培养方面的问题 已有1人参与

本人刚刚开始养细胞，细胞是MEF,今天晚上打算传代，用胰消化酶处理时发现有很多的细胞未被消化下来，仍然待在培养皿壁上，但是细胞形状已经由梭形变成椭圆形，我又加了点胰酶并且增长了消化时间，但这些细胞仍然下不来，以前传代没有发生这种情况，这到底是什么情况？大家有了解的吗？求助求助求助。。。。
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保持清醒
1楼 2015-08-24 22:31:41
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smilingworld

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胰酶的浓度是0.25%么？加点EDTA试试，还有MEF一般传代8回。要是在8代以内，细胞变圆，个人感觉应该不是变异啥的，就是细胞应该没问题。
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骚年的奋斗
2楼2015-08-27 10:37:52
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骚年的奋斗

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by smilingworld at 2015-08-27 10:37:52
胰酶的浓度是0.25%么？加点EDTA试试，还有MEF一般传代8回。要是在8代以内，细胞变圆，个人感觉应该不是变异啥的，就是细胞应该没问题。

今天又传了一次，结果仍然有很多细胞消化不下来（虽然细胞变圆了，但仍然贴在壁上），我的这个细胞传代已经超过八代了，是不是传代次数多了就会这样。
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保持清醒
3楼2015-08-27 17:25:33
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smilingworld

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 骚年的奋斗 at 2015-08-27 17:25:33
今天又传了一次，结果仍然有很多细胞消化不下来（虽然细胞变圆了，但仍然贴在壁上），我的这个细胞传代已经超过八代了，是不是传代次数多了就会这样。...

只能说传代次数多了，有可能会这样，最好是8代以内。建议楼主换一管新的，就是从零下200度（也有保存在零下80度的，取决于保存液体的不同）的环境里刚拿出来的那种，等着爬满flask的壁了，在显微镜下好好观察，毕竟刚开始，多下一些功夫，加油。还有要注意，传代的时候一定不要被污染到（污染后的，营养液会变浑浊，细胞会死掉，形态残缺，漂浮起来）。
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4楼2015-08-27 19:04:54
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