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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » HepG2细胞免疫荧光实验
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小猪漫步210

金虫 (正式写手)

[求助] HepG2细胞免疫荧光实验 已有2人参与

最近做了一个免疫荧光实验，Anti-Human Serum Albumin antibody（鼠）        Abcam        ab10241，Anti-Cytochrome P450 3A4 antibody（鼠）        Santa cruz        sc-53850是一抗，二抗是Goat Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor® 647)        Abcam        ab150119。具体的操作步骤是：细胞种植在培养皿中两天，等细胞贴壁之后进行处理。1，PBS洗两遍，无水甲醇固定5分钟，吸出甲醇，PBS洗两遍，加入一抗。一抗用PBS稀释。4°过夜，然后加入二抗，二抗用PBS稀释。一个小时后观察荧光。但是没有观察到荧光。
有没有做过这两个荧光的大神。求指导。头一次做，原来是炼钢的，，，，突然跑来做生物，，，好悲催
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1楼 2015-08-17 10:48:43
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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小猪漫步210: 金币+5 2015-08-20 16:36:55
首先确定一抗是小鼠来源的，固定细胞后，可以用1%Triton打孔25min-30min，然后羊血清封闭37度，20分钟，再加一、二抗
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医学&统计学
2楼2015-08-17 17:14:32
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小猪漫步210

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2015-08-17 17:14:32
首先确定一抗是小鼠来源的，固定细胞后，可以用1%Triton打孔25min-30min，然后羊血清封闭37度，20分钟，再加一、二抗

没有羊血清，BSA封闭可以不？

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3楼2015-08-18 22:40:23
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2015-08-19 09:05:38
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小猪漫步210

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ghqiu09 at 2015-08-19 09:05:38
一抗二抗用PBS稀释？反正我们不是，然后我们固定细胞也不用甲醛，我们用的是4%的多聚甲醛 室温30分钟

你们用什么稀释呢？
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5楼2015-08-19 09:27:07
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chengzongru

新虫 (初入文坛)
你用的是羊抗鼠的二抗，所以应该用山羊血清封闭，这样效果好，当然BSA也可以
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6楼2015-09-16 17:09:01
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小猪漫步210

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by chengzongru at 2015-09-16 17:09:01
你用的是羊抗鼠的二抗，所以应该用山羊血清封闭，这样效果好，当然BSA也可以

嗯嗯，多谢多谢
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7楼2015-09-19 14:36:54
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