24小时热门版块排行榜    

查看: 1707  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小猪漫步210

金虫 (正式写手)

[求助] HepG2细胞免疫荧光实验 已有2人参与

最近做了一个免疫荧光实验,Anti-Human Serum Albumin antibody(鼠)        Abcam        ab10241,Anti-Cytochrome P450 3A4 antibody(鼠)        Santa cruz        sc-53850是一抗,二抗是Goat Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor® 647)        Abcam        ab150119。具体的操作步骤是:细胞种植在培养皿中两天,等细胞贴壁之后进行处理。1,PBS洗两遍,无水甲醇固定5分钟,吸出甲醇,PBS洗两遍,加入一抗。一抗用PBS稀释。4°过夜,然后加入二抗,二抗用PBS稀释。一个小时后观察荧光。但是没有观察到荧光。
有没有做过这两个荧光的大神。求指导。头一次做,原来是炼钢的,,,,突然跑来做生物,,,好悲催
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ghqiu09

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

4楼2015-08-19 09:05:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小猪漫步210: 金币+5 2015-08-20 16:36:55
首先确定一抗是小鼠来源的,固定细胞后,可以用1%Triton打孔25min-30min,然后羊血清封闭37度,20分钟,再加一、二抗
医学&统计学
2楼2015-08-17 17:14:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猪漫步210

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2015-08-17 17:14:32
首先确定一抗是小鼠来源的,固定细胞后,可以用1%Triton打孔25min-30min,然后羊血清封闭37度,20分钟,再加一、二抗

没有羊血清,BSA封闭可以不?

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-08-18 22:40:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猪漫步210

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ghqiu09 at 2015-08-19 09:05:38
一抗二抗用PBS稀释?反正我们不是,然后我们固定细胞也不用甲醛,我们用的是4%的多聚甲醛 室温30分钟

你们用什么稀释呢?
5楼2015-08-19 09:27:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见