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小猪漫步210

金虫 (正式写手)

[求助] HepG2细胞免疫荧光实验已有2人参与

最近做了一个免疫荧光实验,Anti-Human Serum Albumin antibody(鼠)        Abcam        ab10241,Anti-Cytochrome P450 3A4 antibody(鼠)        Santa cruz        sc-53850是一抗,二抗是Goat Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor® 647)        Abcam        ab150119。具体的操作步骤是:细胞种植在培养皿中两天,等细胞贴壁之后进行处理。1,PBS洗两遍,无水甲醇固定5分钟,吸出甲醇,PBS洗两遍,加入一抗。一抗用PBS稀释。4°过夜,然后加入二抗,二抗用PBS稀释。一个小时后观察荧光。但是没有观察到荧光。
有没有做过这两个荧光的大神。求指导。头一次做,原来是炼钢的,,,,突然跑来做生物,,,好悲催
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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小猪漫步210: 金币+5 2015-08-20 16:36:55
首先确定一抗是小鼠来源的,固定细胞后,可以用1%Triton打孔25min-30min,然后羊血清封闭37度,20分钟,再加一、二抗
医学&统计学
2楼2015-08-17 17:14:32
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小猪漫步210

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2015-08-17 17:14:32
首先确定一抗是小鼠来源的,固定细胞后,可以用1%Triton打孔25min-30min,然后羊血清封闭37度,20分钟,再加一、二抗

没有羊血清,BSA封闭可以不?

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-08-18 22:40:23
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
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4楼2015-08-19 09:05:38
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小猪漫步210

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ghqiu09 at 2015-08-19 09:05:38
一抗二抗用PBS稀释?反正我们不是,然后我们固定细胞也不用甲醛,我们用的是4%的多聚甲醛 室温30分钟

你们用什么稀释呢?
5楼2015-08-19 09:27:07
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chengzongru

新虫 (初入文坛)

你用的是羊抗鼠的二抗,所以应该用山羊血清封闭,这样效果好,当然BSA也可以
6楼2015-09-16 17:09:01
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小猪漫步210

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by chengzongru at 2015-09-16 17:09:01
你用的是羊抗鼠的二抗,所以应该用山羊血清封闭,这样效果好,当然BSA也可以

嗯嗯,多谢多谢
7楼2015-09-19 14:36:54
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