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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重叠（融合）PCR遇到的问题
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Lily丶

铁虫 (小有名气)

[求助] 重叠（融合）PCR遇到的问题 已有6人参与

最近小虫正在做三片段的融合PCR,暂且将这三个片段称为A,B,C.先PCR产物液回收了各片段，并且融合出了疑似三片段一起的长片段ABC.然后对长片段做鉴定时，能够扩出A,B,C三个小片段，但却不能以融合的长片段为模板来扩出长片段，请问这是什么原因呐？！求指教～

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-08-11 23:18:25
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ppppppppp

新虫 (小有名气)
楼主你怎么和我遇到的问题惊人的相似啊。
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初来乍到，请多指教
3楼2015-08-12 12:59:15
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sunqx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Lily丶: 金币+1 2015-08-13 10:07:59
先两个连，再连第三个

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-08-12 13:30:16
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Lily丶: 金币+1, ★有帮助 2015-08-13 07:50:17
ABC是胶回收吗，还有鉴定ABC，最好的办法是测序。
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2楼2015-08-12 11:41:40
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普通回帖

人车

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Lily丶: 金币+1 2015-08-13 10:21:03
你说的出现了疑似融合的片段有电泳图之类的吗？  你鉴定的时候引物用的是什么呢？
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5楼2015-08-12 14:39:51
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Lily丶

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gongeleven at 2015-08-12 11:41:40
ABC是胶回收吗，还有鉴定ABC，最好的办法是测序。

各片段A、B、C是采用的PCR产物直接液回收，没用切胶回收~
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6楼2015-08-13 10:07:22
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Lily丶

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ppppppppp at 2015-08-12 12:59:15
楼主你怎么和我遇到的问题惊人的相似啊。

你也是鉴定不出长片段吗？
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7楼2015-08-13 10:07:42
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Lily丶

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sunqx at 2015-08-12 13:30:16
先两个连，再连第三个

我感觉我是三个片段融合上了的，只是不能用融合的再来扩出长片段~
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8楼2015-08-13 10:08:58
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Lily丶

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 人车 at 2015-08-12 14:39:51
你说的出现了疑似融合的片段有电泳图之类的吗？  你鉴定的时候引物用的是什么呢？

第一张图片是ABC的融合，第二张是切胶回收ABC长片段，第三张是PCR鉴定各小片段以及长片段~
重叠（融合）PCR遇到的问题
1.G148-1769 LSR融合PCR.jpg


重叠（融合）PCR遇到的问题-1
3.G148-1769 LSR各片段鉴定.jpg


重叠（融合）PCR遇到的问题-2
2.G148-1769 LSR切胶回收 .jpg
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9楼2015-08-13 10:19:03
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人车

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Lily丶 at 2015-08-13 10:19:03
第一张图片是ABC的融合，第二张是切胶回收ABC长片段，第三张是PCR鉴定各小片段以及长片段~

1.G148-1769 LSR融合PCR.jpg

3.G148-1769 LSR各片段鉴定.jpg

2.G148-1769 LSR切胶回收 .jpg
...

不知道你的MARKER是多少 通过第二张图相加和第一个图的大小是一样的吗？ 你验证长片段的时候是两端用的AC两侧引物进行的吗？
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10楼2015-08-13 14:19:47
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