应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 原核表达始终构建载体不成功！！！！
191/2返回列表12下一页
查看: 2045  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

院士陈

铁虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达始终构建载体不成功！！！！ 已有4人参与

本人近几个月一直在做原核表达可是怎么都构建不出重组质粒，我要表达的目的基因全序列1950bp，起初做TA克隆都是一次性完成，但是当做表达切除信号肽加酶切位点时，片段大小约1900bp怎么都连不上表达载体，当实验室的师兄说先把片段连入T载体，再连表达载体，可是这时怎么都连不少T载体了，按理来说，片段变小了应该更好连才是呀，可是怎么都没连上每次连接都有算载体与目的DNA的质量比，就是1:3～1:8。可是就算这样还是没有的心好累，看不到前方的曙光，跪求木虫吧大神指点迷津，愿天下好人一生平安！！！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-08-11 00:34:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按照你的说法，那就是连接体系、连接条件可能有问题。把你的具体体系和条件写一下
赞一下 回复此楼
2楼2015-08-11 08:19:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinxuan0904

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-14 23:29:20
先连到T-vector，再做酶切和胶回收，再按比例连~
赞一下 回复此楼
3楼2015-08-11 09:45:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zergbloody

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加285772160谈吧 具体跟你说一下

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-08-11 10:37:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

院士陈

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 673643401 at 2015-08-11 08:19:47
按照你的说法，那就是连接体系、连接条件可能有问题。把你的具体体系和条件写一下

连接体系10ul的 二十的都试过了，不行呀，而且我每次连接都是16度过夜的。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2015-08-13 15:41:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

院士陈

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jinxuan0904 at 2015-08-11 09:45:10
先连到T-vector，再做酶切和胶回收，再按比例连~

对呀，问题的关键是自从我把我的片段切去信号肽了T载体一点都不好连，完全连不上了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2015-08-13 15:44:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinxuan0904

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 院士陈 at 2015-08-13 15:44:28
对呀，问题的关键是自从我把我的片段切去信号肽了T载体一点都不好连，完全连不上了
...

你切了信号肽，后面的三个A是不是掉了！！！
赞一下 回复此楼
7楼2015-08-14 20:21:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

院士陈

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jinxuan0904 at 2015-08-14 20:21:02
你切了信号肽，后面的三个A是不是掉了！！！...

什么三个A？你是说三个A？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2015-08-16 12:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljzdhdh0

铁虫 (小有名气)
一楼现在可在？看你的阐述，实验过程存在疑问，关键点在于：你去掉信号肽部分的DNA并引入酶切点是如何做的？
赞一下 回复此楼
9楼2015-08-16 15:23:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunqx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

陈院士，您好。实验遇到问题的时候，所有用的东西全换新的，重新做。是所有东西。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2015-08-16 15:39:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 新世纪牛马 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭