应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 原核表达始终构建载体不成功！！！！
191/2返回列表12下一页
查看: 2172  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

院士陈

铁虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达始终构建载体不成功！！！！ 已有4人参与

本人近几个月一直在做原核表达可是怎么都构建不出重组质粒，我要表达的目的基因全序列1950bp，起初做TA克隆都是一次性完成，但是当做表达切除信号肽加酶切位点时，片段大小约1900bp怎么都连不上表达载体，当实验室的师兄说先把片段连入T载体，再连表达载体，可是这时怎么都连不少T载体了，按理来说，片段变小了应该更好连才是呀，可是怎么都没连上每次连接都有算载体与目的DNA的质量比，就是1:3～1:8。可是就算这样还是没有的心好累，看不到前方的曙光，跪求木虫吧大神指点迷津，愿天下好人一生平安！！！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-08-11 00:34:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按照你的说法，那就是连接体系、连接条件可能有问题。把你的具体体系和条件写一下
赞一下 回复此楼
2楼2015-08-11 08:19:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinxuan0904

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-14 23:29:20
先连到T-vector，再做酶切和胶回收，再按比例连~
赞一下 回复此楼
3楼2015-08-11 09:45:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zergbloody

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加285772160谈吧 具体跟你说一下

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-08-11 10:37:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

院士陈

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 673643401 at 2015-08-11 08:19:47
按照你的说法，那就是连接体系、连接条件可能有问题。把你的具体体系和条件写一下

连接体系10ul的 二十的都试过了，不行呀，而且我每次连接都是16度过夜的。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2015-08-13 15:41:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

院士陈

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jinxuan0904 at 2015-08-11 09:45:10
先连到T-vector，再做酶切和胶回收，再按比例连~

对呀，问题的关键是自从我把我的片段切去信号肽了T载体一点都不好连，完全连不上了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2015-08-13 15:44:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinxuan0904

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 院士陈 at 2015-08-13 15:44:28
对呀，问题的关键是自从我把我的片段切去信号肽了T载体一点都不好连，完全连不上了
...

你切了信号肽，后面的三个A是不是掉了！！！
赞一下 回复此楼
7楼2015-08-14 20:21:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

院士陈

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jinxuan0904 at 2015-08-14 20:21:02
你切了信号肽，后面的三个A是不是掉了！！！...

什么三个A？你是说三个A？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2015-08-16 12:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljzdhdh0

铁虫 (小有名气)
一楼现在可在？看你的阐述，实验过程存在疑问，关键点在于：你去掉信号肽部分的DNA并引入酶切点是如何做的？
赞一下 回复此楼
9楼2015-08-16 15:23:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunqx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

陈院士，您好。实验遇到问题的时候，所有用的东西全换新的，重新做。是所有东西。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2015-08-16 15:39:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 新世纪牛马 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +10 Zhao anqi 2026-03-22 10/500 2026-03-24 00:08 by Equinoxhua
[考研] 材料292调剂 +4 橘颂思美人 2026-03-23 4/200 2026-03-23 23:16 by peike
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 083200学硕321分一志愿暨南大学求调剂 +3 innocenceF 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:35 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭