应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 原核表达始终构建载体不成功！！！！
191/2返回列表12下一页
查看: 2400  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

院士陈

铁虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达始终构建载体不成功！！！！ 已有4人参与

本人近几个月一直在做原核表达可是怎么都构建不出重组质粒，我要表达的目的基因全序列1950bp，起初做TA克隆都是一次性完成，但是当做表达切除信号肽加酶切位点时，片段大小约1900bp怎么都连不上表达载体，当实验室的师兄说先把片段连入T载体，再连表达载体，可是这时怎么都连不少T载体了，按理来说，片段变小了应该更好连才是呀，可是怎么都没连上每次连接都有算载体与目的DNA的质量比，就是1:3～1:8。可是就算这样还是没有的心好累，看不到前方的曙光，跪求木虫吧大神指点迷津，愿天下好人一生平安！！！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-08-11 00:34:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按照你的说法，那就是连接体系、连接条件可能有问题。把你的具体体系和条件写一下
赞一下 回复此楼
2楼2015-08-11 08:19:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinxuan0904

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-14 23:29:20
先连到T-vector，再做酶切和胶回收，再按比例连~
赞一下 回复此楼
3楼2015-08-11 09:45:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zergbloody

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加285772160谈吧 具体跟你说一下

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-08-11 10:37:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

院士陈

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 673643401 at 2015-08-11 08:19:47
按照你的说法，那就是连接体系、连接条件可能有问题。把你的具体体系和条件写一下

连接体系10ul的 二十的都试过了，不行呀，而且我每次连接都是16度过夜的。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2015-08-13 15:41:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

院士陈

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jinxuan0904 at 2015-08-11 09:45:10
先连到T-vector，再做酶切和胶回收，再按比例连~

对呀，问题的关键是自从我把我的片段切去信号肽了T载体一点都不好连，完全连不上了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2015-08-13 15:44:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinxuan0904

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 院士陈 at 2015-08-13 15:44:28
对呀，问题的关键是自从我把我的片段切去信号肽了T载体一点都不好连，完全连不上了
...

你切了信号肽，后面的三个A是不是掉了！！！
赞一下 回复此楼
7楼2015-08-14 20:21:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

院士陈

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jinxuan0904 at 2015-08-14 20:21:02
你切了信号肽，后面的三个A是不是掉了！！！...

什么三个A？你是说三个A？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2015-08-16 12:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljzdhdh0

铁虫 (小有名气)
一楼现在可在？看你的阐述，实验过程存在疑问，关键点在于：你去掉信号肽部分的DNA并引入酶切点是如何做的？
赞一下 回复此楼
9楼2015-08-16 15:23:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunqx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

陈院士，您好。实验遇到问题的时候，所有用的东西全换新的，重新做。是所有东西。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2015-08-16 15:39:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 新世纪牛马 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 5/250 2026-08-23 12:09 by LR9qGULyN2ew
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +15 羊腰板 2026-08-21 16/800 2026-08-23 10:45 by process2012
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 14/700 2026-08-23 10:30 by wrm
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 11/550 2026-08-23 02:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭