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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 原核表达始终构建载体不成功！！！！
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jinxuan0904

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 院士陈 at 2015-08-16 12:29:27
什么三个A？你是说三个A？
...

是啊，TA克隆的三个A 啊
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11楼2015-08-16 19:44:03
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院士陈

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ljzdhdh0 at 2015-08-16 15:23:11
一楼现在可在？看你的阐述，实验过程存在疑问，关键点在于：你去掉信号肽部分的DNA并引入酶切点是如何做的？

设计个引物呗，加了酶切位点，略过信号肽扩增就是了

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12楼2015-08-17 04:24:07
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院士陈

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 院士陈 at 2015-08-17 04:24:07
设计个引物呗，加了酶切位点，略过信号肽扩增就是了
...

你说的是平末端连接么？我设计酶切位点前就设计了3个保护碱基

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13楼2015-08-17 04:26:06
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liu208xj

金虫 (正式写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-08-17 23:25:32
信息量少，不好分析，有几个方面可以注意下
1）酶的质量
2）酶切位点设计是否恰当，也就是选的两个酶有没有冲突？是否是同尾酶？有没有协同作用等等
3）连接酶有没有问题，失活没有？
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14楼2015-08-17 13:48:46
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院士陈

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by sunqx at 2015-08-16 15:39:14
陈院士，您好。实验遇到问题的时候，所有用的东西全换新的，重新做。是所有东西。

我都不敢再这样浪费钱了

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15楼2015-08-20 02:35:20
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院士陈

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by liu208xj at 2015-08-17 13:48:46
信息量少，不好分析，有几个方面可以注意下
1）酶的质量
2）酶切位点设计是否恰当，也就是选的两个酶有没有冲突？是否是同尾酶？有没有协同作用等等
3）连接酶有没有问题，失活没有？

我送到公司了他们用的他们公司就是当下吹的那种百分之百可以连上的载体，也做出来阳性了序列我也看了些，可是当我对质粒酶切检测时发现居然连上的我的目的片段变小了，也是奇怪。但是我送的以前测序的样扩增出来也是对的呀，为什么连T载体居然变小了。。。更可气的是公司的人完全不动脑子，MD 我都说了我的目的片段多大还有我要连pmd19-t，居然用他们公司的，我想的用就用吧，妈的他们公司载体1.8k.我的目的片段1.9k这让我真怀疑他们有用脑子在做实验没

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16楼2015-08-20 02:42:11
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liu208xj

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 院士陈 at 2015-08-20 02:42:11
我送到公司了他们用的他们公司就是当下吹的那种百分之百可以连上的载体，也做出来阳性了序列我也看了些，可是当我对质粒酶切检测时发现居然连上的我的目的片段变小了，也是奇怪。但是我送的以前测序的样扩增出来也 ...

变小多少？
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17楼2015-08-26 08:36:44
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院士陈

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by liu208xj at 2015-08-26 08:36:44
变小多少？...

450bp

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18楼2015-08-30 04:28:19
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
基因有毒，换宿主

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19楼2015-08-30 10:25:58
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