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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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院士陈

铁虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达始终构建载体不成功！！！！ 已有4人参与

本人近几个月一直在做原核表达可是怎么都构建不出重组质粒，我要表达的目的基因全序列1950bp，起初做TA克隆都是一次性完成，但是当做表达切除信号肽加酶切位点时，片段大小约1900bp怎么都连不上表达载体，当实验室的师兄说先把片段连入T载体，再连表达载体，可是这时怎么都连不少T载体了，按理来说，片段变小了应该更好连才是呀，可是怎么都没连上每次连接都有算载体与目的DNA的质量比，就是1:3～1:8。可是就算这样还是没有的心好累，看不到前方的曙光，跪求木虫吧大神指点迷津，愿天下好人一生平安！！！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-08-11 00:34:15
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liu208xj

金虫 (正式写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-08-17 23:25:32
信息量少，不好分析，有几个方面可以注意下
1）酶的质量
2）酶切位点设计是否恰当，也就是选的两个酶有没有冲突？是否是同尾酶？有没有协同作用等等
3）连接酶有没有问题，失活没有？
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14楼2015-08-17 13:48:46
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673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按照你的说法，那就是连接体系、连接条件可能有问题。把你的具体体系和条件写一下
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2楼2015-08-11 08:19:47
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jinxuan0904

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-14 23:29:20
先连到T-vector，再做酶切和胶回收，再按比例连~
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3楼2015-08-11 09:45:10
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zergbloody

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加285772160谈吧 具体跟你说一下

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-08-11 10:37:24
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