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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » α-亚麻酸和γ-亚麻酸苯酰肼同分异构体的色谱分离
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被镌刻的时光

新虫 (小有名气)
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19楼: Originally posted by superyeast at 2015-08-17 14:23:23
你有没有试过把溶剂梯度放缓，流速加快。

最好把详细条件贴出来。...

有的，我从0.1的流速，乙腈：水梯度：0-20min60:30~70:30
0.2的流速乙腈：水梯度：0-10min45:55~50:10，都放缓试过各种梯度的，就是分离度达不到
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21楼2015-08-17 14:35:48
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被镌刻的时光

新虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by superyeast at 2015-08-17 14:27:02
你这个化合物有邻位硝基，酸性蛮强的。试试加TFA或磷酸。...

有邻位硝基，酸性很强？是说是N-H上的氢电离才有强酸性吗？我问过其他人说是接近中性所以我有点混乱了，也试过用磷酸调ph到3和2.5，不调酸直接用水（6.3）氨水调碱到10，都有试过分离度没有大的变化最多从1.39到1.40。你说的用三乙胺这是属于离子对试剂么?为什么文献里提到在ph=7时呈分子状态呢，但高PH下离子化（感觉有点矛盾）
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22楼2015-08-17 14:43:34
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klicking

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 被镌刻的时光 at 2015-08-17 14:19:56
那就是我应该要换色谱柱了对吗？那请问我的物质结构来看调ph缓冲盐和离子对试剂是没有用的么？其中一个物质结构图见下

亚油酸衍生产物.png
...

该物质侧链较长，个人认为调节pH和使用离子对试剂基本上用处不大，这类物质的分离关键还是看色谱柱与物质之间的选择性！T3你也只能试一试了，T3对含有极性官能团的分子保留与选择性比较好。
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归零
23楼2015-08-17 14:48:02
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
21楼: Originally posted by 被镌刻的时光 at 2015-08-16 22:35:48
有的，我从0.1的流速，乙腈：水梯度：0-20min60:30~70:30
0.2的流速乙腈：水梯度：0-10min45:55~50:10，都放缓试过各种梯度的，就是分离度达不到...

你的起始极性太强。至少从90%水开始走，终止极性70%乙腈左右即可。

TFA指三氟乙酸。HPLC-UV可以用，但MS不能用。

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24楼2015-08-17 14:51:24
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被镌刻的时光

新虫 (小有名气)
引用回帖:
23楼: Originally posted by klicking at 2015-08-17 14:48:02
该物质侧链较长，个人认为调节pH和使用离子对试剂基本上用处不大，这类物质的分离关键还是看色谱柱与物质之间的选择性！T3你也只能试一试了，T3对含有极性官能团的分子保留与选择性比较好。...

恩我也问过一些师兄师姐，也是这样解释的，不过最后实在分离不出来，所以也有尝试，但是没有效果，只是没有尝试三乙胺。可能就是固定相的选择性问题比较大。只是老师希望我搞清楚这个物质的性质，从本质上去考虑，所以想问问我的物质显什么性？文献里说的乙酸苯酰肼高PH下呈离子化状态（我这个化合物在中性是呈淡黄色的，加碱后呈紫色，这根分子存在状态有关吗？），PH=7下分子状态，我就不知道怎么回事了。
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25楼2015-08-17 15:03:12
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被镌刻的时光

新虫 (小有名气)
引用回帖:
24楼: Originally posted by superyeast at 2015-08-17 14:51:24
你的起始极性太强。至少从90%水开始走，终止极性70%乙腈左右即可。

TFA指三氟乙酸。HPLC-UV可以用，但MS不能用。
...

恩，我的化合物如果起始已经比例太低，出峰时间会很晚。我这些化合物在HPLC上流动相乙腈和水的比例要达到86:14.我的物质感觉非极性比较强。有的人说我这个化合物因碳链太长所以调酸碱用处不大哦，所以你说的呈强酸性我有点不明白额（因为我调过ph分离度没什么大变化）
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26楼2015-08-17 15:06:41
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
26楼: Originally posted by 被镌刻的时光 at 2015-08-16 23:06:41
恩，我的化合物如果起始已经比例太低，出峰时间会很晚。我这些化合物在HPLC上流动相乙腈和水的比例要达到86:14.我的物质感觉非极性比较强。有的人说我这个化合物因碳链太长所以调酸碱用处不大哦，所以你说的呈强酸 ...

你可以使用非常快的梯度，但起始梯度不要太强。试试30%乙腈左右。流速应该上去。2.1的柱子应该走到0.2-0.3的样子。你可以试试甲醇体系加碳酸铵（5-10mM）的梯度。另外温度因素可以再试一下，比方说加到五六十度是不是有出峰反转。

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27楼2015-08-17 21:25:52
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被镌刻的时光

新虫 (小有名气)
引用回帖:
27楼: Originally posted by superyeast at 2015-08-17 21:25:52
你可以使用非常快的梯度，但起始梯度不要太强。试试30%乙腈左右。流速应该上去。2.1的柱子应该走到0.2-0.3的样子。你可以试试甲醇体系加碳酸铵（5-10mM）的梯度。另外温度因素可以再试一下，比方说加到五六十度是不 ...

好的 谢谢，我先尝试一下
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28楼2015-08-19 10:18:15
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kf1009

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这类型的化合物对pH值不敏感，不要从pH值着手，从分子极性上去考虑。选柱子吧，C8、苯基或嵌有极性基团的柱子对分离有利；流动相也可以考虑更换体系，THF的建议可以再试试，也许您尝试的不够。
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快乐不需要走遍天涯去寻找，只需播一粒种子在脚下。
29楼2015-08-19 11:05:43
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被镌刻的时光

新虫 (小有名气)
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29楼: Originally posted by kf1009 at 2015-08-19 11:05:43
这类型的化合物对pH值不敏感，不要从pH值着手，从分子极性上去考虑。选柱子吧，C8、苯基或嵌有极性基团的柱子对分离有利；流动相也可以考虑更换体系，THF的建议可以再试试，也许您尝试的不够。

你好，我之前尝试过加异丙醇分开了，可持续了20多天后，现在重复不出来以前的效果了，很奇怪，分析不出原因。所以现在想在尝试四氢呋喃，5%的没有效果，想尝试10%，想问大概多大的四氢呋喃的浓度会对柱子损害大？？？
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30楼2015-12-05 18:28:35
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