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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 第一次pcr产物无条带，第二次有条带
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雪碧三块五

铁虫 (初入文坛)

[求助] 第一次pcr产物无条带，第二次有条带 已有1人参与

第一次pcr电泳检测无条带，只有二聚体
用第一次pcr产物直接进行二次pcr就有条带出现
请教各位大神这是什么情况
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1楼 2015-08-06 14:30:55
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673643401

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 雪碧三块五 at 2015-08-06 16:04:42
是目的条带
buffer2.5 mg2 dntp0.25 酶0.2 引物各加0.5 模板20ng
预变性95，7min
95，1min
61，1min
72，30s
28个循环
...

建议把退火温度降低点，55度试一下。你的体系我看不懂，我一般是以体积为单位的
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4楼2015-08-06 16:14:47
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673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第二次的PCR条带是你的目的条带吗？你这种情况原因很多
PCR扩增条件、模板、buffer、退火温度等。把你的实验条件和步骤写详细点
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2楼2015-08-06 15:20:17
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雪碧三块五

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 673643401 at 2015-08-06 15:20:17
第二次的PCR条带是你的目的条带吗？你这种情况原因很多
PCR扩增条件、模板、buffer、退火温度等。把你的实验条件和步骤写详细点

是目的条带
buffer2.5 mg2 dntp0.25 酶0.2 引物各加0.5 模板20ng
预变性95，7min
95，1min
61，1min
72，30s
28个循环

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3楼2015-08-06 16:04:42
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雪碧三块五

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 673643401 at 2015-08-06 16:14:47
建议把退火温度降低点，55度试一下。你的体系我看不懂，我一般是以体积为单位的...

都是ul啊，模板是ng

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5楼2015-08-06 17:25:35
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