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比永远都要远

新虫 (初入文坛)

[求助] 一种DNA一种引物PCR之后是不是只用一个条带？ 已有3人参与

使用一个DNA样品，一种引物，进行PCR扩增（设置8个温度梯度），120V电压，70min，照胶出来就只有一个条带，我的结果有问题吗？

一种DNA一种引物PCR之后是不是只用一个条带？
PCR.jpg
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1楼 2015-08-05 19:52:40
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-05 23:00:17
你这个图看起来并不是一条带，是弥散带。另外你的DNA是基因组DNA？
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2楼2015-08-05 21:52:47
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比永远都要远

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-08-05 21:52:47
你这个图看起来并不是一条带，是弥散带。另外你的DNA是基因组DNA？

是的我的DNA 是基因组DNA ,那什么原因产生的弥散呢？
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3楼2015-08-07 11:24:15
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 比永远都要远 at 2015-08-07 11:24:15
是的我的DNA 是基因组DNA ,那什么原因产生的弥散呢？...

基因组DNA用单引物扩，扩出来的是一系列长度不一致的片段，所以应该是弥散带。
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4楼2015-08-07 21:43:41
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比永远都要远

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2015-08-07 21:43:41
基因组DNA用单引物扩，扩出来的是一系列长度不一致的片段，所以应该是弥散带。...

您的意思是说我加的是单引物？


还有我做了一个稀释DNAD浓度的对比试验跑出来结果是这样的，中间跑出来的条带的是一个稀释浓度
一种DNA一种引物PCR之后是不是只用一个条带？-1
2015年8月6号降低模板DNA浓度出现条带.jpg
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5楼2015-08-08 14:51:37
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
比永远都要远: 金币+10 2015-08-11 13:00:48
引用回帖:
5楼: Originally posted by 比永远都要远 at 2015-08-08 14:51:37
您的意思是说我加的是单引物？


还有我做了一个稀释DNAD浓度的对比试验跑出来结果是这样的，中间跑出来的条带的是一个稀释浓度

2015年8月6号降低模板DNA浓度出现条带.jpg
...

哦，你说的一种引物是指一对引物，是吗？我理解错了，还以为你用的一条引物扩增的。从你后面这个图看，应该是DNA浓度过高，既然稀释后扩出来了就用稀释后的扩，一般DNA模板量在10-200ng范围内。
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6楼2015-08-10 10:08:14
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

产生弥散的原因有很多，你这个估计是样品吧酶处理好 看看这篇文章，有解决弥散提高特异性的不错http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-08-10 10:52:33
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fly_锋

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

其实楼主的第一张图，是在不同温度下的结果，跑出这样其实是算不错的，结果表明第三个孔的温度是最适合你的引物的。这个类似于筛选最佳温度。另外最后两个孔在较高位置好像也出现条带，你得根据产物大小，确定下，到底那个是你要的。至于降解拖带这个问题，有好多解释，看你后续做什么了，如果就是测个序什么的，这也是没有问题的
。希望可以帮到你！
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8楼2015-08-10 11:01:06
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