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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 发酵罐离线灭菌问题
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松松一号

木虫 (正式写手)

[求助] 发酵罐离线灭菌问题 已有3人参与

发酵真菌使用的7.5升小试发酵罐，需要离线灭菌，即将整个罐体注入培养基后放入灭菌锅内灭菌，使用的是上海博讯立式蒸汽灭菌器。
现在的问题是由于培养基中有比较多的大豆淀粉、玉米淀粉等不溶物，经过122度/30min 灭菌后不能彻底除菌，造成发酵开始后杂菌生长。对于此大家有什么建议吗？谢谢。
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try try ! Day Day comfortable……
1楼 2015-08-05 09:17:51
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棘白菌素

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, 鼓励新虫 2015-08-06 19:57:49
zhang8826857: MicEPI+1, 回答的很好 2015-08-06 19:58:05
松松一号: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-08-07 13:07:42
说一些经验吧，希望对你有帮助，淀粉这个物料比较容易糊化结块产生包埋，尤其是离线灭菌无搅拌的情况，随着后期发酵的进行，包埋体被慢慢释放，染菌也是一个必然现象，针对这种情况，可以尝试从下面几个方面解决看看：
1、用淀粉水解产物，如麦芽糊精、麦芽糖等，我们有个菌就是这样解决的，效果还可以，不同菌需要去考察试试。
2、做小罐子的话，可以先煮沸搅匀后再灭菌试试；
3、降低淀粉的比例，后期确实需要该类碳源，可以再流加补足；
只要能做到一定产物水平，适当的变动问题应该是必需的，希望对你有帮助。
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青春留不住，白发自然生！
3楼2015-08-05 18:28:03
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不吃肉肉的鱼

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, 鼓励新虫 2015-08-06 19:57:36
松松一号: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-08-07 13:07:49
像比较容易带菌的玉米淀粉和大豆淀粉加入到培养基中时，在灭菌前一定要先对其用热水进行溶解搅拌均匀，同时在加热灭菌时，灭菌时间可以稍加延长，因为现在还不知道楼主培养基中其他物料的成分，所以不好判断具体的灭菌方案，此外楼主常常后期染菌，要考虑是不是有其他方面的问题，不一定都是由于培养基灭菌不彻底造成的
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2楼2015-08-05 13:53:42
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普通回帖

松松一号

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不吃肉肉的鱼 at 2015-08-05 13:53:42
像比较容易带菌的玉米淀粉和大豆淀粉加入到培养基中时，在灭菌前一定要先对其用热水进行溶解搅拌均匀，同时在加热灭菌时，灭菌时间可以稍加延长，因为现在还不知道楼主培养基中其他物料的成分，所以不好判断具体的灭 ...

将配置的培养基过滤一次去掉不溶物后灭菌使用就没有后期染菌了，但是这样又造成培养基成分的改变。。
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4楼2015-08-06 08:44:42
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松松一号

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 棘白菌素 at 2015-08-05 18:28:03
说一些经验吧，希望对你有帮助，淀粉这个物料比较容易糊化结块产生包埋，尤其是离线灭菌无搅拌的情况，随着后期发酵的进行，包埋体被慢慢释放，染菌也是一个必然现象，针对这种情况，可以尝试从下面几个方面解决看看 ...

多谢分享经验。
用淀粉水解产物和用淀粉的区别大吗？是否可以使用淀粉水解酶呢。
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5楼2015-08-06 08:52:10
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不吃肉肉的鱼

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 松松一号 at 2015-08-06 08:44:42
将配置的培养基过滤一次去掉不溶物后灭菌使用就没有后期染菌了，但是这样又造成培养基成分的改变。。...

培养基有不溶物的话，有可能是你培养基中的相关成分在高温时互相反应的结果，大多会形成微溶的化合物，比如氢氧化镁。因此你在选择培养基成分的时候就要考虑到这个。即使必须选择会互相反应的成分，在灭菌时也要尽量分开灭菌，尽量避免形成不溶物。此外，如楼上所说，培养基中高糖高氮的成分，尤其是玉米淀粉，是极易成团的，但是一般来说，高温溶解搅拌均匀是可以让其很好的分散的。冒味问一下，楼主染的是什么菌？芽孢吗？
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6楼2015-08-06 10:31:15
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棘白菌素

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 松松一号 at 2015-08-06 08:52:10
多谢分享经验。
用淀粉水解产物和用淀粉的区别大吗？是否可以使用淀粉水解酶呢。...

区别大不大还是尝试一下才行，淀粉水解酶也可以，不过我们当时最初也是加酶，后来效果不好才换成水解物的。
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青春留不住，白发自然生！
7楼2015-08-06 11:41:07
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mumuzhen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
2楼的分析很专业，主要问题你使用的原料淀粉在没有搅拌的情况下，很容易结块，营养体或芽孢藏在里面很难彻底灭活。一般还是将淀粉类糊化后再去离线灭菌。
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8楼2015-08-07 10:03:32
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小花木兰

银虫 (小有名气)
不知你消毒温度和时间是多少，另外你的罐装料量是多少，你物料含水量是多少，我们以前做固体发酵，没有发现消不透物料的
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9楼2015-08-07 15:35:51
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895514338

新虫 (初入文坛)
木薯都是先调浆加酶液化再灭菌
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10楼2015-08-08 16:56:12
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