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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 怎样提高融合蛋白表达量
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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 怎样提高融合蛋白表达量 已有6人参与

在BL21菌株中诱导表达蛋白，用的是GST标签，做了几次发现上清里面诱导的蛋白很少，挂柱洗脱后几乎看不见条带。沉淀（包涵体）蛋白还比较多。诱导条件试过IPTG 0.5mM 16度过夜，但IPTG 改成0.3mM 16度过夜后总体诱导表达量就减少了，上清沉淀都少，该怎么解决呢？最后蛋白是要用来测酶活的，所以诱导纯化过程不能破坏酶活。请有经验者帮助！
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1楼 2015-08-02 19:49:25
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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
23楼: Originally posted by 13153014358 at 2016-05-12 20:23:38
请问楼主的带GST标签的蛋白纯化出来了吗。。。我最近也一直在纯化GST标签的蛋白，等着测酶活，250ml的菌体，0.3mMIPTG,30度诱导4小时，超声破碎，最后纯化出来的浓度一直特别低....目的蛋白大小在50多KDa,加上GST标 ...

我最后纯化的量也很少啊，没有摸到特别好的条件

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24楼2016-05-13 07:53:49
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