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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 怎样提高融合蛋白表达量 已有6人参与

在BL21菌株中诱导表达蛋白,用的是GST标签,做了几次发现上清里面诱导的蛋白很少,挂柱洗脱后几乎看不见条带。沉淀(包涵体)蛋白还比较多。诱导条件试过IPTG 0.5mM 16度过夜,但IPTG 改成0.3mM 16度过夜后总体诱导表达量就减少了,上清沉淀都少,该怎么解决呢?最后蛋白是要用来测酶活的,所以诱导纯化过程不能破坏酶活。请有经验者帮助!
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zxfeffie

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
诱导时转速是多少,太快了可能也不好,我们都是用180 rpm,你可以试试。
也可能是你自己蛋白的原因造成的沉淀,换换MBP标签试试。
5楼2015-08-03 15:27:26
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