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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 想要做western，关于蛋白提取的问题
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15269179761

银虫 (初入文坛)

[求助] 想要做western，关于蛋白提取的问题 已有3人参与

马上实验需要做到western，想做磷酸化的EGFR，但是膜蛋白的提取不是很明白，因为实验室都做胞质蛋白或核蛋白，没人做过膜蛋白的western，请问，提取时应该怎么做，需要注意什么
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1楼 2015-07-31 11:43:14
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sheepshowzz

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

膜蛋白要用含detergent的RIPA做提取蛋白.
直接sonication的效果會很差. 而核蛋白通常就必須做sonication.
膜蛋白就用RIPA放冰上30分鐘~2小時, 想到可以去輕拍幾下.
之後4度離心取上清液.

要測磷酸化蛋白記得要加NA3VO4.
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abcdogbitepig
7楼2015-08-06 10:50:11
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
全细胞裂解液就能啊    fas dr5 都能做出来
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2楼2015-07-31 21:25:40
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

全细胞裂解液就能啊    fas dr5 都能做出来
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3楼2015-07-31 21:27:16
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15269179761

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by linyingjia at 2015-07-31 21:27:16
全细胞裂解液就能啊    fas dr5 都能做出来

直接用全细胞裂解液，然后离心取上清么？
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5楼2015-08-05 09:49:12
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