| 查看: 820 | 回复: 8 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 sunmaocai 的 5 个金币 | |||
[交流]
求助 关于筛选
|
|||
|
做好定点突变后怎么进行筛选?怎么确定有没有突变好啊？ [ Last edited by 350784478 on 2009-7-14 at 10:21 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
拟解决的关键科学问题还要不要写
已经有8人回复
-
最失望的一年
已经有12人回复
-
存款400万可以在学校里躺平吗
已经有29人回复
-
求推荐英文EI期刊
已经有5人回复
-
请教限项目规定
已经有4人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有20人回复
-
26申博
已经有3人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有10人回复
-
基金申报
已经有6人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
2楼2008-08-11 10:03:20
bioman9810
木虫 (著名写手)
千娇百媚是哥的妞儿
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1651.6
- 帖子: 1347
- 在线: 44分钟
- 虫号: 581788
- 注册: 2008-07-18
- 性别: GG
- 专业: Helix
3楼2008-08-11 10:03:26
4楼2008-08-11 11:17:30
★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+5,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
reasonspare(金币+5,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
|
如果想确定必需拿去测序，或者由于突变产生或丢失了酶切位点，这样转化之后就可以提取质粒，酶切验证一下 如果没有相关酶切位点，又想提高送测序的阳性率，就要去除掉原始的未突变的质粒DNA 方法是选用从dam+菌株纯化而来的DNA作为模板，由于PCR产物是未甲基化的质粒，而只有当识别位点被甲基化时，才能被Dpn I 切割，所以使用Dpn I 对突变PCR产物进行Dpn I 消化。 （5' ... G A-CH3^T C ... 3' 3' ... C T^A-CH3 G ... 5' ） 理论上这样可以使原始质粒降解，而只保留新的突变体，转化后，理论上长出来的就是你要的阳性克隆。 当然有很多时候点突变要靠运气，包括你设计的突变引物是否好用 因为有些聚合酶会有3`---5`校正功能（如PFU），所以突变点离末端太近是会被纠错的，所以即使有PCR产物，序列也同原始序列一致，不是你想要的突变体  |
5楼2008-08-11 22:36:29
6楼2008-08-12 09:45:19
beckham277
木虫 (职业作家)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2506.3
- 散金: 38
- 帖子: 3533
- 在线: 13.1小时
- 虫号: 581201
- 注册: 2008-07-18
- 专业: 生物化学
7楼2008-08-12 14:39:47
8楼2008-08-15 11:57:48
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
9楼2008-08-15 15:18:52