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辛德瑞拉331

新虫 (初入文坛)

[求助] 巢式PCR扩增有拖尾现象 已有2人参与

用巢式PCR扩增,除了模板外,阳性和阴性对照也都出现了拖尾。。。求问一直有拖尾的原因,体系在下面,图片在附件里

25ul 体系:GoTaq 酶12.5
                  前引物 0.5
                  后引物 0.5
                  BSA 0.25
                  DNA 2
                  水 9.75
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  • 2015-07-24 15:39:54, 17.02 M

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辛德瑞拉331

新虫 (初入文坛)

补充一下,图里面,最后两个条带 分别是阳性和阴性
2楼2015-07-24 16:01:54
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xrxleisure

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
把PCR产物稀释后再做模板试试,有时候模板浓度太大也会P不出来。
3楼2015-07-24 16:54:58
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辛德瑞拉331

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xrxleisure at 2015-07-24 16:54:58
把PCR产物稀释后再做模板试试,有时候模板浓度太大也会P不出来。

可能是目的基因含量比较少,之前把p1产物稀释之后再做的,结果连条带都看不见了…
4楼2015-07-24 19:24:38
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米粒morror

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 辛德瑞拉331 at 2015-07-24 19:24:38
可能是目的基因含量比较少,之前把p1产物稀释之后再做的,结果连条带都看不见了…...

我看到网上别人稀释200倍到500倍作为第二轮的模板,然后我分别做过稀释100、200、500倍,结果还是拖尾现象,没有条带,求指导
5楼2015-08-07 16:38:57
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

对照组也出现了弥散,按照文章上的描述(http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html),酶dNTP用多了?循环数过多?
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
6楼2015-08-10 11:03:39
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