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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 巢式PCR扩增有拖尾现象
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辛德瑞拉331

新虫 (初入文坛)

[求助] 巢式PCR扩增有拖尾现象 已有2人参与

用巢式PCR扩增，除了模板外，阳性和阴性对照也都出现了拖尾。。。求问一直有拖尾的原因，体系在下面，图片在附件里

25ul 体系：GoTaq 酶12.5
                  前引物 0.5
                  后引物 0.5
                  BSA 0.25
                  DNA 2
                  水 9.75
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  • 附件 1 : Administrator_2015-07-24_12_时_22_分.tif
    • 2015-07-24 15:39:54, 17.02 M

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1楼 2015-07-24 15:56:42
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辛德瑞拉331

新虫 (初入文坛)
补充一下，图里面，最后两个条带 分别是阳性和阴性
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2楼2015-07-24 16:01:54
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xrxleisure

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把PCR产物稀释后再做模板试试，有时候模板浓度太大也会P不出来。
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3楼2015-07-24 16:54:58
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辛德瑞拉331

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xrxleisure at 2015-07-24 16:54:58
把PCR产物稀释后再做模板试试，有时候模板浓度太大也会P不出来。

可能是目的基因含量比较少，之前把p1产物稀释之后再做的，结果连条带都看不见了…
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4楼2015-07-24 19:24:38
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米粒morror

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 辛德瑞拉331 at 2015-07-24 19:24:38
可能是目的基因含量比较少，之前把p1产物稀释之后再做的，结果连条带都看不见了…...

我看到网上别人稀释200倍到500倍作为第二轮的模板，然后我分别做过稀释100、200、500倍，结果还是拖尾现象，没有条带，求指导
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5楼2015-08-07 16:38:57
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

对照组也出现了弥散，按照文章上的描述（http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html），酶dNTP用多了？循环数过多？
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
6楼2015-08-10 11:03:39
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