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guaidiandian新虫 (小有名气)
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请问原位杂交的DNA模板怎么制备 已有1人参与
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1 原位杂交的引物怎么设计，有啥要求？ 2 原位杂交的DNA模板有没有长度限制？ 3 做DNA模板时还有什么需要注意的地方？ 要是能把做原位杂交DNA模板的全部过程写出来将不胜感激~~~ |
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jiqinger
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2楼2015-07-21 21:15:25
guaidiandian
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4楼2015-07-22 08:29:33
guaidiandian
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不好意思我还不太明白，设计引物只用在5‘端加上酶切位点吗？ 我写下详细过程您看对不对，因为第一次做也不是很明白！  1 用目的基因的特征序列设计引物，在上下游引物的5’端分别加上两个不同的载体上有的酶切位点。（问题：这个过程对限制性内切酶有什么要求吗？可以从质粒中直接扩增出所需要的那一部分序列么？） 2 将扩增出的片段和载体直接用酶进行酶切，载体是pSPT18和pSPT19，然后用T4DNA连接酶进行连接，然后转化DH5α大肠杆菌，用amp进行筛选。 3 将成功导入的菌落进行扩增然后提取重组质粒，用载体上的酶切位点将质粒线性化（用能产生5‘突出端的酶进行酶切），产生出制备RNA探针的模板。 这个过程对吗？求指教！  |
5楼2015-07-22 11:20:35
jiqinger
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6楼2015-07-22 13:12:26