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99蜗牛99新虫 (小有名气)
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[交流]
如何在载体上加纯化标签 已有3人参与
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| 急！！！前辈们，新虫求助，我想在要表达的蛋白上加上纯化标签，但之前选的载体上没有，还可以直接在载体上加吗，加在N端还是C端表达量多呀？ |
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His标签是蛋白质重组技术中经常用到的一种标签，其序列为六个组氨酸HHHHHH， 其特点是分子量小，基本不改变蛋白质的生物结构，不改变蛋白质的溶解性，更重要的是它使蛋白质的纯化变得极为方便，根据组氨酸上的咪唑环可以与二价金属离子结合的原理，人们可以利金属离子亲和层析技术纯化带有His标签的蛋白，即将含有目的蛋白的裂解液通过固定的二价金属离子（通常是二价Ni离子）填料，带有6*his标签的蛋白质即与填料结合，其它蛋白不与填料结合，最后再用高浓度的咪唑即可将目的蛋白洗脱下来。 His标签单抗可以用来鉴定His标签的蛋白质的表达情况（如目的蛋白的相对表达量、分子量）、在细胞中的定位以及其它特性。 |
11楼2015-07-21 16:11:16
恶魔的左眼
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4楼2015-07-21 09:24:23