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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 超表达载体构建之前克隆基因 测序序列总是与原序列不一样
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晓颗

新虫 (初入文坛)

[求助] 超表达载体构建之前克隆基因 测序序列总是与原序列不一样 已有2人参与

要做载体构建，但是测了好多次序都与原序列不同，同一个培养板上挑菌的序列也不同！！！不过有两个序列的氨基酸序列与原序列相同，这样的话能继续往下做么，已经快做3个月了 再做不出来实验要来不及了。。。。
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1楼 2015-07-17 17:30:26
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晓颗

新虫 (初入文坛)
没有人 自己顶
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2楼2015-07-18 09:46:15
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晓颗

新虫 (初入文坛)
有没有大神帮帮忙呀~~~~
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3楼2015-07-18 09:46:31
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great07225388

新虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-20 22:50:41
引用回帖:
3楼: Originally posted by 晓颗 at 2015-07-18 09:46:31
有没有大神帮帮忙呀~~~~

可能的原因太多。感受态污染？抗性平板污染？等等，建议重新准备这些材料，重做一遍。连载体，转化这些还是比较容易的实验，出问题了好好思考下原因。祝实验成功！

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-07-19 10:58:23
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晓颗

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by great07225388 at 2015-07-19 10:58:23
可能的原因太多。感受态污染？抗性平板污染？等等，建议重新准备这些材料，重做一遍。连载体，转化这些还是比较容易的实验，出问题了好好思考下原因。祝实验成功！
...

都重新准备过 为什么测序就是不对呢？最想知道的就是使用氨基酸序列相同单核苷酸序列不同（是指和原序列相比）的可不可以继续往下做载体构建，最后转入植物进行表达
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5楼2015-07-20 15:08:43
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吾小豆123

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-20 22:50:59
可能NCBI提交的序列和你的序列刚好存在某些位点的SNP。换几种保真性高的酶继续扩，如果还是相同的结果就继续往下做吧。
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6楼2015-07-20 21:42:22
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

序列不同是什么意思，点突变？还是完全不一样？如果是点突变很可能是PCR时导致的，如果氨基酸序列没有突变，也就是同意突变，就可以不管，继续很下做
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
7楼2015-07-21 10:25:19
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晓颗

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by dehong1573 at 2015-07-21 10:25:19
序列不同是什么意思，点突变？还是完全不一样？如果是点突变很可能是PCR时导致的，如果氨基酸序列没有突变，也就是同意突变，就可以不管，继续很下做

就是有的碱基和原来的不一样，但翻译出来的氨基酸序列是一样的，不过我是要把基因导入表达载体做超表达和抑制表达，这样也可以继续往下做吗？
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8楼2015-07-21 21:06:40
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 晓颗 at 2015-07-21 21:06:40
就是有的碱基和原来的不一样，但翻译出来的氨基酸序列是一样的，不过我是要把基因导入表达载体做超表达和抑制表达，这样也可以继续往下做吗？...

可以，没问题的
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
9楼2015-07-22 08:13:34
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晓颗

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by dehong1573 at 2015-07-22 08:13:34
可以，没问题的...

感谢！
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10楼2015-07-22 09:57:40
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