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ls200000

新虫 (初入文坛)

[交流] 琼脂糖电泳问题 已有13人参与

跑了半个月琼脂糖电泳,一直跑不好。

如图:
4个孔都是DNA Mark,全部都是弥散的。最亮的地方是前沿指示剂的位置。换了电泳缓冲液、Mark、电泳槽、电压、水(超市买的屈臣氏蒸馏水)等等,问题依旧。电泳条件:胶浓度1%,电压100v,电泳时间30分钟。

感觉唯一没换的是电泳仪了,难道是电泳仪(已经闲置了5年的电泳仪啊)的问题,请各位大神指教啊!

琼脂糖电泳问题
IMAG0365.jpg
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yufeiwaner

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-07-16 14:49:50
电泳出问题最多的是胶没制好,一定要把琼脂糖彻底微波融化才行。我实验室一般90-110V,时间28-35min,新鲜的电泳缓冲液电流约60-100mA,长期不换则高达120mA。都没问题的。
楼主不如找个同学帮你做一次,或者去别的实验室做一次,很容易就找到原因了!
6楼2015-07-16 09:29:41
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zhqingfang

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
跑DNA,胶的浓度太低,换成1.8%,即100毫升加1.8克琼脂糖,1%只能跑RNA
实验忙碌中
2楼2015-07-15 15:59:03
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普通回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

试试90V   30min
3楼2015-07-15 16:46:54
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祭月江陵

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
电压高了,换70~80。时间长点无所谓

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2015-07-15 17:06:33
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haze12344

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-16 14:49:28
感觉实验条件都可以啊,考虑一下是不是配缓冲液的试剂有问题或者稀释有问题,再就是煮胶
生物你好
5楼2015-07-16 08:07:48
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ls200000

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhqingfang at 2015-07-15 15:59:03
跑DNA,胶的浓度太低,换成1.8%,即100毫升加1.8克琼脂糖,1%只能跑RNA

谢谢,今天下午1.8%试试看
7楼2015-07-16 10:23:15
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ls200000

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yufeiwaner at 2015-07-16 09:29:41
电泳出问题最多的是胶没制好,一定要把琼脂糖彻底微波融化才行。我实验室一般90-110V,时间28-35min,新鲜的电泳缓冲液电流约60-100mA,长期不换则高达120mA。都没问题的。
楼主不如找个同学帮你做一次,或者去别的 ...

我是在电炉上煮,看胶已经澄清,煮开就断火,难道煮的时间短了?我下午再煮时间长点试试看吧。谢谢
8楼2015-07-16 10:27:13
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wangyx0411702

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-16 14:50:15
可能是琼脂糖没有完全溶化。在微波炉里,都要开好几次才能好,电炉煮开就关,估计是没有完全溶化的缘故。完全好时,对着光看,非常澄清透亮,没有小颗粒。
9楼2015-07-16 11:27:59
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zhqingfang

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by ls200000 at 2015-07-16 10:23:15
谢谢,今天下午1.8%试试看...

不谢,祝你顺利
实验忙碌中
10楼2015-07-16 17:17:05
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