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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂糖电泳问题
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ls200000

新虫 (初入文坛)

[交流] 琼脂糖电泳问题 已有13人参与

跑了半个月琼脂糖电泳，一直跑不好。

如图：
4个孔都是DNA Mark，全部都是弥散的。最亮的地方是前沿指示剂的位置。换了电泳缓冲液、Mark、电泳槽、电压、水（超市买的屈臣氏蒸馏水）等等，问题依旧。电泳条件：胶浓度1%，电压100v，电泳时间30分钟。

感觉唯一没换的是电泳仪了，难道是电泳仪（已经闲置了5年的电泳仪啊）的问题，请各位大神指教啊！

琼脂糖电泳问题
IMAG0365.jpg
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1楼 2015-07-15 15:21:40
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yufeiwaner

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-07-16 14:49:50
电泳出问题最多的是胶没制好，一定要把琼脂糖彻底微波融化才行。我实验室一般90-110V，时间28-35min，新鲜的电泳缓冲液电流约60-100mA，长期不换则高达120mA。都没问题的。
楼主不如找个同学帮你做一次，或者去别的实验室做一次，很容易就找到原因了！
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6楼2015-07-16 09:29:41
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zhqingfang

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
跑DNA，胶的浓度太低，换成1.8%，即100毫升加1.8克琼脂糖，1%只能跑RNA
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实验忙碌中
2楼2015-07-15 15:59:03
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普通回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
试试90V   30min
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3楼2015-07-15 16:46:54
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祭月江陵

新虫 (初入文坛)
★
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电压高了，换70~80。时间长点无所谓

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-07-15 17:06:33
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haze12344

银虫 (小有名气)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-16 14:49:28
感觉实验条件都可以啊，考虑一下是不是配缓冲液的试剂有问题或者稀释有问题，再就是煮胶
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生物你好
5楼2015-07-16 08:07:48
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ls200000

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhqingfang at 2015-07-15 15:59:03
跑DNA，胶的浓度太低，换成1.8%，即100毫升加1.8克琼脂糖，1%只能跑RNA

谢谢，今天下午1.8%试试看
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7楼2015-07-16 10:23:15
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ls200000

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yufeiwaner at 2015-07-16 09:29:41
电泳出问题最多的是胶没制好，一定要把琼脂糖彻底微波融化才行。我实验室一般90-110V，时间28-35min，新鲜的电泳缓冲液电流约60-100mA，长期不换则高达120mA。都没问题的。
楼主不如找个同学帮你做一次，或者去别的 ...

我是在电炉上煮，看胶已经澄清，煮开就断火，难道煮的时间短了？我下午再煮时间长点试试看吧。谢谢
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8楼2015-07-16 10:27:13
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wangyx0411702

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-16 14:50:15
可能是琼脂糖没有完全溶化。在微波炉里，都要开好几次才能好，电炉煮开就关，估计是没有完全溶化的缘故。完全好时，对着光看，非常澄清透亮，没有小颗粒。
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9楼2015-07-16 11:27:59
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zhqingfang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ls200000 at 2015-07-16 10:23:15
谢谢，今天下午1.8%试试看...

不谢，祝你顺利
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实验忙碌中
10楼2015-07-16 17:17:05
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