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棒棒虫

新虫 (初入文坛)

[求助] 求快速破碎大量大肠杆菌的方法 已有10人参与

现在在做大肠杆菌发酵实验,产物是胞内酶,但是现在缺少高效的、快速的大量细胞破碎方法,希望各路大神多多指教~~
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 棒棒虫 at 2015-07-14 13:28:15
这个文献能在哪找得到?...

http://www.detaibio.com/topics/protein-purification-cailiaoyuchuli.html
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
7楼2015-07-14 13:49:23
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的蛋白的稳定性怎么样?大量的话可以用冻融破碎,但是可能会引起蛋白的降解和失活,且速度较慢。
我个人还是偏向于用超声裂解,虽说每次破碎量少,但是比较好控制,具体操作你可以看下这个:蛋白分离纯化之不同材料的预处理方法

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
2楼2015-07-14 10:10:04
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
棒棒虫: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-07-14 13:30:19
超声、溶菌酶、蛋白酶K都可以用
超声根据仪器功率先做预实验,保证样品EP管不发热就可以了,尽量冰水浴下超声
溶菌酶一般用量是5~10mg/ml差不多可以了,37度半小时,或者室温1.5小时,基本都化了。。。。
蛋白酶K用量是20-50ug/ml,55度水浴0.5-1.5小时,也都化了。。。反正能用,超声速度快一点,但是有可能会把蛋白部分变性,因为局部温度会很高,关键自己控制。另外2个酶处理就是时间有点长。。。没啥副作用。
3楼2015-07-14 11:14:44
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laoliu2962

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
高压均浆机(配备制冷系统)就可以了
4楼2015-07-14 11:15:27
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