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棒棒虫

新虫 (初入文坛)

[求助] 求快速破碎大量大肠杆菌的方法已有10人参与

现在在做大肠杆菌发酵实验,产物是胞内酶,但是现在缺少高效的、快速的大量细胞破碎方法,希望各路大神多多指教~~
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
你的蛋白的稳定性怎么样?大量的话可以用冻融破碎,但是可能会引起蛋白的降解和失活,且速度较慢。
我个人还是偏向于用超声裂解,虽说每次破碎量少,但是比较好控制,具体操作你可以看下这个:蛋白分离纯化之不同材料的预处理方法

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
2楼2015-07-14 10:10:04
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laoliu2962

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
高压均浆机(配备制冷系统)就可以了
4楼2015-07-14 11:15:27
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
棒棒虫: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-07-14 13:30:19
超声、溶菌酶、蛋白酶K都可以用
超声根据仪器功率先做预实验,保证样品EP管不发热就可以了,尽量冰水浴下超声
溶菌酶一般用量是5~10mg/ml差不多可以了,37度半小时,或者室温1.5小时,基本都化了。。。。
蛋白酶K用量是20-50ug/ml,55度水浴0.5-1.5小时,也都化了。。。反正能用,超声速度快一点,但是有可能会把蛋白部分变性,因为局部温度会很高,关键自己控制。另外2个酶处理就是时间有点长。。。没啥副作用。
3楼2015-07-14 11:14:44
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

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引用回帖:
5楼: Originally posted by 棒棒虫 at 2015-07-14 13:28:15
这个文献能在哪找得到?...

http://www.detaibio.com/topics/protein-purification-cailiaoyuchuli.html
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
7楼2015-07-14 13:49:23
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lihliu2014

金虫 (著名写手)

工业打法-----均质机    也叫高压匀浆机。多少量都给你破了
9楼2015-07-14 15:27:48
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loganfan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
小量的话超声破碎、反复冻融都很容易实现,大量的话一般使用高压匀浆法,但目前来说,要找到一个好的高压匀浆仪器也不容易,既要考虑制冷、压力足够,又要保证机器容易使用,不易发生堵塞,好清洁。
10楼2015-07-14 16:11:46
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思凡

木虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
高压匀浆机就能满足你的要求,我们实验室有个小的,一般我们半小时能破大概1L吧
16楼2015-07-16 17:19:41
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bugliuyun

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by lihliu2014 at 2015-07-14 15:27:48
工业打法-----均质机    也叫高压匀浆机。多少量都给你破了

一台junzhiji.差不多八万美元
17楼2016-03-03 15:37:19
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l626s118

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by lihliu2014 at 2015-07-14 15:27:48
工业打法-----均质机    也叫高压匀浆机。多少量都给你破了

这个靠谱,其它的几种都是实验室小规模,我们厂菌质机一个小时可以破几吨

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只专注于一件事
18楼2016-03-03 16:55:05
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l626s118

银虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by bugliuyun at 2016-03-03 15:37:19
一台junzhiji.差不多八万美元...

便宜的只要5万人民币

发自小木虫Android客户端
只专注于一件事
19楼2016-03-03 16:55:35
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棒棒虫

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-14 10:10:04
你的蛋白的稳定性怎么样?大量的话可以用冻融破碎,但是可能会引起蛋白的降解和失活,且速度较慢。
我个人还是偏向于用超声裂解,虽说每次破碎量少,但是比较好控制,具体操作你可以看下这个:蛋白分离纯化之不同材 ...

这个文献能在哪找得到?
5楼2015-07-14 13:28:15
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棒棒虫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by laoliu2962 at 2015-07-14 11:15:27
高压均浆机(配备制冷系统)就可以了

这个仪器一次性破碎量多大?效果怎么样?
6楼2015-07-14 13:31:56
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扬帆A心海

木虫 (著名写手)

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感谢参与,应助指数 +1
用小刀割碎它!开个玩笑~

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8楼2015-07-14 14:18:27
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