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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 求快速破碎大量大肠杆菌的方法
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棒棒虫

新虫 (初入文坛)

[求助] 求快速破碎大量大肠杆菌的方法 已有10人参与

现在在做大肠杆菌发酵实验，产物是胞内酶，但是现在缺少高效的、快速的大量细胞破碎方法，希望各路大神多多指教~~
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1楼 2015-07-14 09:21:37
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的蛋白的稳定性怎么样？大量的话可以用冻融破碎，但是可能会引起蛋白的降解和失活，且速度较慢。
我个人还是偏向于用超声裂解，虽说每次破碎量少，但是比较好控制，具体操作你可以看下这个：蛋白分离纯化之不同材料的预处理方法
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

棒棒虫
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
2楼2015-07-14 10:10:04
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laoliu2962

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
高压均浆机（配备制冷系统）就可以了
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4楼2015-07-14 11:15:27
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
棒棒虫: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-07-14 13:30:19
超声、溶菌酶、蛋白酶K都可以用
超声根据仪器功率先做预实验，保证样品EP管不发热就可以了，尽量冰水浴下超声
溶菌酶一般用量是5~10mg/ml差不多可以了，37度半小时，或者室温1.5小时，基本都化了。。。。
蛋白酶K用量是20-50ug/ml，55度水浴0.5-1.5小时，也都化了。。。反正能用，超声速度快一点，但是有可能会把蛋白部分变性，因为局部温度会很高，关键自己控制。另外2个酶处理就是时间有点长。。。没啥副作用。
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3楼2015-07-14 11:14:44
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 棒棒虫 at 2015-07-14 13:28:15
这个文献能在哪找得到？...

http://www.detaibio.com/topics/protein-purification-cailiaoyuchuli.html
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
7楼2015-07-14 13:49:23
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lihliu2014

金虫 (著名写手)
工业打法-----均质机    也叫高压匀浆机。多少量都给你破了
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9楼2015-07-14 15:27:48
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loganfan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小量的话超声破碎、反复冻融都很容易实现，大量的话一般使用高压匀浆法，但目前来说，要找到一个好的高压匀浆仪器也不容易，既要考虑制冷、压力足够，又要保证机器容易使用，不易发生堵塞，好清洁。
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10楼2015-07-14 16:11:46
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思凡

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
高压匀浆机就能满足你的要求，我们实验室有个小的，一般我们半小时能破大概1L吧
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16楼2015-07-16 17:19:41
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bugliuyun

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lihliu2014 at 2015-07-14 15:27:48
工业打法-----均质机    也叫高压匀浆机。多少量都给你破了

一台junzhiji.差不多八万美元
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17楼2016-03-03 15:37:19
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l626s118

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lihliu2014 at 2015-07-14 15:27:48
工业打法-----均质机    也叫高压匀浆机。多少量都给你破了

这个靠谱，其它的几种都是实验室小规模，我们厂菌质机一个小时可以破几吨

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只专注于一件事
18楼2016-03-03 16:55:05
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l626s118

银虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by bugliuyun at 2016-03-03 15:37:19
一台junzhiji.差不多八万美元...

便宜的只要5万人民币

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只专注于一件事
19楼2016-03-03 16:55:35
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普通回帖

棒棒虫

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-14 10:10:04
你的蛋白的稳定性怎么样？大量的话可以用冻融破碎，但是可能会引起蛋白的降解和失活，且速度较慢。
我个人还是偏向于用超声裂解，虽说每次破碎量少，但是比较好控制，具体操作你可以看下这个：蛋白分离纯化之不同材 ...

这个文献能在哪找得到？
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5楼2015-07-14 13:28:15
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棒棒虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by laoliu2962 at 2015-07-14 11:15:27
高压均浆机（配备制冷系统）就可以了

这个仪器一次性破碎量多大？效果怎么样？
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6楼2015-07-14 13:31:56
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扬帆A心海

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用小刀割碎它！开个玩笑～

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8楼2015-07-14 14:18:27
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