应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 求快速破碎大量大肠杆菌的方法
201/2返回列表12下一页
查看: 3431  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

棒棒虫

新虫 (初入文坛)

[求助] 求快速破碎大量大肠杆菌的方法 已有10人参与

现在在做大肠杆菌发酵实验，产物是胞内酶，但是现在缺少高效的、快速的大量细胞破碎方法，希望各路大神多多指教~~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-07-14 09:21:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的蛋白的稳定性怎么样？大量的话可以用冻融破碎，但是可能会引起蛋白的降解和失活，且速度较慢。
我个人还是偏向于用超声裂解，虽说每次破碎量少，但是比较好控制，具体操作你可以看下这个：蛋白分离纯化之不同材料的预处理方法
赞一下(3人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

棒棒虫
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
2楼2015-07-14 10:10:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laoliu2962

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
高压均浆机（配备制冷系统）就可以了
赞一下(3人) 回复此楼
4楼2015-07-14 11:15:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
棒棒虫: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-07-14 13:30:19
超声、溶菌酶、蛋白酶K都可以用
超声根据仪器功率先做预实验，保证样品EP管不发热就可以了，尽量冰水浴下超声
溶菌酶一般用量是5~10mg/ml差不多可以了，37度半小时，或者室温1.5小时，基本都化了。。。。
蛋白酶K用量是20-50ug/ml，55度水浴0.5-1.5小时，也都化了。。。反正能用，超声速度快一点，但是有可能会把蛋白部分变性，因为局部温度会很高，关键自己控制。另外2个酶处理就是时间有点长。。。没啥副作用。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2015-07-14 11:14:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 棒棒虫 at 2015-07-14 13:28:15
这个文献能在哪找得到？...

http://www.detaibio.com/topics/protein-purification-cailiaoyuchuli.html
赞一下(1人) 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
7楼2015-07-14 13:49:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihliu2014

金虫 (著名写手)
工业打法-----均质机    也叫高压匀浆机。多少量都给你破了
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2015-07-14 15:27:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loganfan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小量的话超声破碎、反复冻融都很容易实现，大量的话一般使用高压匀浆法，但目前来说，要找到一个好的高压匀浆仪器也不容易，既要考虑制冷、压力足够，又要保证机器容易使用，不易发生堵塞，好清洁。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2015-07-14 16:11:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

思凡

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
高压匀浆机就能满足你的要求，我们实验室有个小的，一般我们半小时能破大概1L吧
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2015-07-16 17:19:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bugliuyun

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lihliu2014 at 2015-07-14 15:27:48
工业打法-----均质机    也叫高压匀浆机。多少量都给你破了

一台junzhiji.差不多八万美元
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2016-03-03 15:37:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l626s118

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lihliu2014 at 2015-07-14 15:27:48
工业打法-----均质机    也叫高压匀浆机。多少量都给你破了

这个靠谱，其它的几种都是实验室小规模，我们厂菌质机一个小时可以破几吨

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
只专注于一件事
18楼2016-03-03 16:55:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l626s118

银虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by bugliuyun at 2016-03-03 15:37:19
一台junzhiji.差不多八万美元...

便宜的只要5万人民币

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
只专注于一件事
19楼2016-03-03 16:55:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

棒棒虫

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-14 10:10:04
你的蛋白的稳定性怎么样？大量的话可以用冻融破碎，但是可能会引起蛋白的降解和失活，且速度较慢。
我个人还是偏向于用超声裂解，虽说每次破碎量少，但是比较好控制，具体操作你可以看下这个：蛋白分离纯化之不同材 ...

这个文献能在哪找得到？
赞一下 回复此楼
5楼2015-07-14 13:28:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

棒棒虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by laoliu2962 at 2015-07-14 11:15:27
高压均浆机（配备制冷系统）就可以了

这个仪器一次性破碎量多大？效果怎么样？
赞一下 回复此楼
6楼2015-07-14 13:31:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

扬帆A心海

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用小刀割碎它！开个玩笑～

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2015-07-14 14:18:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 棒棒虫 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 14:41 by QXtWNz7PI7wZ
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +6 archvillain 2026-08-15 10/500 2026-08-15 14:29 by 枫叶之巅
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 12:33 by KxMI1BYBxWX1
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +6 Ldrop2023 2026-08-13 6/300 2026-08-15 10:09 by tuanggou
[基金申请] filecode +7 cratir 2026-08-14 11/550 2026-08-15 06:19 by 学员8dgXkO
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:41 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:28 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭