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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求长片段pcr扩增大神！！！！！
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徐官冲123

新虫 (小有名气)

[求助] 求长片段pcr扩增大神！！！！！ 已有11人参与

本人最近在扩增长片段pcr，目的片段是7445bp，扩增原理：先用两对兼并引物各扩增出1000bp左右的片段，在根据这两个片段设计特异性引物扩增。但是设计了好几对特异性引物都没有扩出长片段，新手不知道是模板浓度不够？基因组DNA浓度是260ng/ul，还是引物不够长？现在是25bp，是否需要添加甜菜碱等类的物质？新手头一回做这个，师哥没有做过并且已经毕业了，老师对这个也不太懂，周围同学也没做过这么长的片段，跪求大神指导，顺道给个建议，感激不尽
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1楼 2015-07-02 16:22:52
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徐官冲123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by freud1981213 at 2015-07-02 21:53:27
首先，考虑你的要扩增的目的基因组质量，是否完整，有更多空间结构。其次你的引物特异性，是否在目的片段上不是特别好。最后，就是优化PCR方法。这么长的片段不难扩增的。

我也觉得不会太难，我在调整一下引物吧，优化pcr方法能具体说一下吗？谢谢
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13楼2015-07-03 08:48:50
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接用长片段PCR扩增试剂盒就可以了，扩增片段20 kb都能扩增出来，又不贵
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rainwater
2楼2015-07-02 16:37:28
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
takara的LA预混酶就是扩大片段的

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-07-02 17:10:16
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
考虑这么多，直接用长片段PCRLA Taq DNA聚合酶试剂盒就行了，简单模板可以扩增三十几kb，基因组也可以扩增20kb的啊，，，你的酶没用对吧
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-07-02 17:15:36
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