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雨中飞蝶

新虫 (初入文坛)

[交流] 碱基突变 已有4人参与

我现在根据NCBI里的PRRSV的高致病力SD16-N蛋白序列设计的带有酶切位点的引物，然后进行PCR，经克隆后测序，发现有一个碱基发生率突变，导致异亮氨酸变为了精氨酸，这对蛋白质的结构功能影响大吗？会影响后续蛋白的表达吗？
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1楼 2015-07-01 14:50:36
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
对表达的影响估计不大，但一个氨基酸的改变对蛋白质的结构功能影响有多大还真说不好，各种情况都有，没有规律。
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2楼2015-07-01 18:11:55
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易水秋寒

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不好说，不放心就突变回去吧。
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3楼2015-07-02 09:15:51
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雨中飞蝶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 易水秋寒 at 2015-07-02 09:15:51
不好说，不放心就突变回去吧。

谢谢！
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4楼2015-07-02 11:14:10
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雨中飞蝶

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by lxj341401 at 2015-07-01 18:11:55
对表达的影响估计不大，但一个氨基酸的改变对蛋白质的结构功能影响有多大还真说不好，各种情况都有，没有规律。

其实，是想将该蛋白表达出来后，作为抗原进行包被，用于后续Elisa酶联免疫检测试剂盒的研发。现在就是担心，这一个碱基的突变，会不会对整个蛋白的抗原性会有影响，以致对后续都有影响。如果开头就是错误的，那后面根本就无意义了。
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5楼2015-07-02 11:17:42
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小松果2012

银虫 (正式写手)
很简单，重构啊
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6楼2015-07-02 12:41:34
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雨中飞蝶

新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by 小松果2012 at 2015-07-02 12:41:34
很简单，重构啊

我们没有模板，质粒就是拿的人家给的，然后将质粒进行转化、克隆出来后，用PCR扩增回收，进行的再构建。所以给的质粒就是这样了，所以我才关心，突变后是否对后续有影响。
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7楼2015-07-02 16:02:37
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sundan611

铁虫 (小有名气)
★
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1.目的基因多长？要是做蛋白表达严谨的话都用高保真TAQ酶，你要是片段短200-300bp左右也就无所谓什么TAQ酶了，你PCR的之后测序的时候最好多送几个克隆，挑没有突变的克隆，不可能都有突变对吧？
2.如果由于片段长突变不可避免，你就挑只有一个突变的做个定点突变给突变回去，也不难的
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8楼2015-07-02 16:06:55
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雨中飞蝶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sundan611 at 2015-07-02 16:06:55
1.目的基因多长？要是做蛋白表达严谨的话都用高保真TAQ酶，你要是片段短200-300bp左右也就无所谓什么TAQ酶了，你PCR的之后测序的时候最好多送几个克隆，挑没有突变的克隆，不可能都有突变对吧？
2.如果由于片段长突 ...

目的基因369bp，主要是没有模板，质粒就是拿的人家给的，然后将质粒进行转化、克隆出来后，用PCR扩增回收，进行的再构建。所以给的质粒就是这样了，所以我才关心，突变后是否对后续有影响。你说的突变回去是什么意思，可以将再构建的质粒突变回去吗？
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9楼2015-07-02 16:26:27
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 雨中飞蝶 at 2015-07-02 16:26:27
目的基因369bp，主要是没有模板，质粒就是拿的人家给的，然后将质粒进行转化、克隆出来后，用PCR扩增回收，进行的再构建。所以给的质粒就是这样了，所以我才关心，突变后是否对后续有影响。你说的突变回去是什么意 ...

采用定点突变的方法直接突变回去，设计一对引物，全质粒PCR，很简单的。
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10楼2015-07-02 16:49:23
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