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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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雨中飞蝶

新虫 (初入文坛)

[交流] 碱基突变 已有4人参与

我现在根据NCBI里的PRRSV的高致病力SD16-N蛋白序列设计的带有酶切位点的引物,然后进行PCR,经克隆后测序,发现有一个碱基发生率突变,导致异亮氨酸变为了精氨酸,这对蛋白质的结构功能影响大吗?会影响后续蛋白的表达吗?
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
对表达的影响估计不大,但一个氨基酸的改变对蛋白质的结构功能影响有多大还真说不好,各种情况都有,没有规律。
2楼2015-07-01 18:11:55
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易水秋寒

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不好说,不放心就突变回去吧。
3楼2015-07-02 09:15:51
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雨中飞蝶

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 易水秋寒 at 2015-07-02 09:15:51
不好说,不放心就突变回去吧。

谢谢!
4楼2015-07-02 11:14:10
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雨中飞蝶

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2015-07-01 18:11:55
对表达的影响估计不大,但一个氨基酸的改变对蛋白质的结构功能影响有多大还真说不好,各种情况都有,没有规律。

其实,是想将该蛋白表达出来后,作为抗原进行包被,用于后续Elisa酶联免疫检测试剂盒的研发。现在就是担心,这一个碱基的突变,会不会对整个蛋白的抗原性会有影响,以致对后续都有影响。如果开头就是错误的,那后面根本就无意义了。
5楼2015-07-02 11:17:42
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小松果2012

银虫 (正式写手)

很简单,重构啊
6楼2015-07-02 12:41:34
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雨中飞蝶

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小松果2012 at 2015-07-02 12:41:34
很简单,重构啊

我们没有模板,质粒就是拿的人家给的,然后将质粒进行转化、克隆出来后,用PCR扩增回收,进行的再构建。所以给的质粒就是这样了,所以我才关心,突变后是否对后续有影响。
7楼2015-07-02 16:02:37
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sundan611

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1.目的基因多长?要是做蛋白表达严谨的话都用高保真TAQ酶,你要是片段短200-300bp左右也就无所谓什么TAQ酶了,你PCR的之后测序的时候最好多送几个克隆,挑没有突变的克隆,不可能都有突变对吧?
2.如果由于片段长突变不可避免,你就挑只有一个突变的做个定点突变给突变回去,也不难的
8楼2015-07-02 16:06:55
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雨中飞蝶

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by sundan611 at 2015-07-02 16:06:55
1.目的基因多长?要是做蛋白表达严谨的话都用高保真TAQ酶,你要是片段短200-300bp左右也就无所谓什么TAQ酶了,你PCR的之后测序的时候最好多送几个克隆,挑没有突变的克隆,不可能都有突变对吧?
2.如果由于片段长突 ...

目的基因369bp,主要是没有模板,质粒就是拿的人家给的,然后将质粒进行转化、克隆出来后,用PCR扩增回收,进行的再构建。所以给的质粒就是这样了,所以我才关心,突变后是否对后续有影响。你说的突变回去是什么意思,可以将再构建的质粒突变回去吗?
9楼2015-07-02 16:26:27
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 雨中飞蝶 at 2015-07-02 16:26:27
目的基因369bp,主要是没有模板,质粒就是拿的人家给的,然后将质粒进行转化、克隆出来后,用PCR扩增回收,进行的再构建。所以给的质粒就是这样了,所以我才关心,突变后是否对后续有影响。你说的突变回去是什么意 ...

采用定点突变的方法直接突变回去,设计一对引物,全质粒PCR,很简单的。
10楼2015-07-02 16:49:23
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