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雨中飞蝶

新虫 (初入文坛)

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[交流] 碱基突变已有4人参与

我现在根据NCBI里的PRRSV的高致病力SD16-N蛋白序列设计的带有酶切位点的引物，然后进行PCR，经克隆后测序，发现有一个碱基发生率突变，导致异亮氨酸变为了精氨酸，这对蛋白质的结构功能影响大吗？会影响后续蛋白的表达吗？

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1楼 2015-07-01 14:50:36

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雨中飞蝶

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引用回帖:

8楼: Originally posted by sundan611 at 2015-07-02 16:06:55
1.目的基因多长？要是做蛋白表达严谨的话都用高保真TAQ酶，你要是片段短200-300bp左右也就无所谓什么TAQ酶了，你PCR的之后测序的时候最好多送几个克隆，挑没有突变的克隆，不可能都有突变对吧？
2.如果由于片段长突 ...

目的基因369bp，主要是没有模板，质粒就是拿的人家给的，然后将质粒进行转化、克隆出来后，用PCR扩增回收，进行的再构建。所以给的质粒就是这样了，所以我才关心，突变后是否对后续有影响。你说的突变回去是什么意思，可以将再构建的质粒突变回去吗？