应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】凝胶电泳：为什么制出来的胶会这样
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
101/1返回列表
查看: 1036  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

dongdong00

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】凝胶电泳：为什么制出来的胶会这样

由于目标蛋白的分子量大约在8 kDa ，为了分离这些蛋白，我想选择尝试用20%的分离胶。但是在制胶的过程中，发现制出来的胶和玻璃板之间总是会出现一些气泡状花纹（道胶的时候没有气泡），看起来似乎是胶和玻璃板贴合的不紧密。这些气泡开始的时候没有，但是聚合5分钟左右就开始出现，而且越来越多。一般在玻璃板的两边开始出现。做了好多次都是这样，不知道是什么原因。请大家帮忙分析一下。谢谢！
其中分离胶的配置：
H2O(ml)                       1.6
30%丙烯酰胺        13
1.5mol/lTrisHCl
(PH8.8) (ml)        5
10%SDS(ml)        0.2
10%AP(ml)                       0.2
TEMED(μl)                        7
总体积(ml)                       20

[ Last edited by dongdong00 on 2008-7-31 at 16:59 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2008-07-31 16:55:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
dongdong00(金币+1,VIP+0):谢谢。
1、加了AP和TEMED之后要剧烈震荡（之前也要震荡几下），因为聚合的时候是排气的过程。我用50ml的离心管来配胶，所以震荡起来很方便
2、是不是玻璃板没有硅化好？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2008-07-31 21:31:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★
dongdong00(金币+3,VIP+0):我觉得你分析的很对，我做了各种比例的胶，发现胶浓度越大，产生那样的花纹就会越多。谢谢你的意见，我会尝试一下的
从楼主描述的情况看应该是因为胶浓度太大，在胶凝固过程中体积缩小，导致与玻璃板分离所致。
这种情况下，胶一般是可以用的（我们配的胶偶尔出现这样情况，基本无影响）

建议：如果想分离这种目标蛋白，必然要在有限的胶长度上提高分辨率，而提高分辨率的方法不能一味的提高胶浓度。有一种办法是配制正常15%分离胶，但配方中的水用等量的甘油替换，楼主不妨试试，可以达到意想不到的效果。（有什么细节不清楚的，欢迎与我共同探讨）
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2008-08-01 01:59:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
dongdong00(金币+1,VIP+0):谢谢。
其实，15%的胶已经够浓了，连小分子RNA都能分离，更何况是8kD的蛋白
赞一下 回复此楼
4楼2008-08-01 09:01:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hu6704526

银虫 (小有名气)
按楼主的情况来看，我觉得分离这么大的蛋白质的话可以利用一个梯度的凝胶会好点，节省电泳的时间啊，而且效果也不错的。有关气泡我也遇到过，可能也是如上面所说的是浓度太大的原因，其实分离8K的没有必要用那么大浓度的
赞一下 回复此楼
5楼2008-08-01 22:58:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

playboy723

金虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
应该是板子没有洗干净  有油脂的污染  你拿洗洁精好好洗洗
另外配完分离胶后一定要封胶   防止空气进入   总之  配胶是很关键的步骤  一定要仔细   否则下游的试验将是白搭
赞一下(10人) 回复此楼
6楼2008-08-02 18:14:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongdong00

银虫 (小有名气)
不知道为什么，降低胶的浓度到12%也还有这样的现象，奇怪了。不知道大家知不知道要怎么避免
赞一下 回复此楼
7楼2008-08-04 16:09:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyjack

12%的胶，看到一个同学出现过这种情况，一天做了3快板子，还是不行，最后重新配了tris-hcl，再制胶就好了。原来老液已经3个月了。
赞一下 回复此楼
8楼2008-08-19 23:47:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhengchen5916

铜虫 (小有名气)
所有试剂倒掉重配！
还有，过硫酸铵的连是不是太多了，建议少加点试试，我都是加90微升。
赞一下 回复此楼
9楼2008-09-25 15:02:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dongdong00 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 315分求调剂 +6 26考研上岸版26 2026-03-26 6/300 2026-03-27 19:54 by WYUMater
[考研] 一志愿上海理工能源动力（085800）310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 286求调剂 +8 PolarBear11 2026-03-26 8/400 2026-03-27 18:05 by yu221
[考研] 考研调剂 +4 Sanmu-124 2026-03-26 4/200 2026-03-27 17:49 by kiokin
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +5 Ong3 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:24 by goldfish51
[考研] 315调剂 +4 0860求调剂 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:23 by wangjy2002
[考研] 材料求调剂 +8 @taotao 2026-03-21 8/400 2026-03-27 11:21 by wangjy2002
[考研] 材料学硕333求调剂 +8 北道巷 2026-03-24 8/400 2026-03-27 10:18 by 我是小康
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:17 by guoweigw
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料，材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 340求调剂 +3 Amber00 2026-03-26 3/150 2026-03-26 18:57 by 不吃魚的貓
[考研] 0856求调剂 +8 zhn03 2026-03-25 9/450 2026-03-26 13:42 by zzll406
[考研] 总分293求调剂 +6 加一一九 2026-03-25 8/400 2026-03-26 13:30 by yujianx
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭