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【求助】凝胶电泳：为什么制出来的胶会这样
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由于目标蛋白的分子量大约在8 kDa ，为了分离这些蛋白，我想选择尝试用20%的分离胶。但是在制胶的过程中，发现制出来的胶和玻璃板之间总是会出现一些气泡状花纹（道胶的时候没有气泡），看起来似乎是胶和玻璃板贴合的不紧密。这些气泡开始的时候没有，但是聚合5分钟左右就开始出现，而且越来越多。一般在玻璃板的两边开始出现。做了好多次都是这样，不知道是什么原因。请大家帮忙分析一下。谢谢！ 其中分离胶的配置： H2O(ml) 1.6 30%丙烯酰胺 13 1.5mol/lTrisHCl (PH8.8) (ml) 5 10%SDS(ml) 0.2 10%AP(ml) 0.2 TEMED(μl) 7 总体积(ml) 20 [ Last edited by dongdong00 on 2008-7-31 at 16:59 ] |
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2楼2008-07-31 21:31:25
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dongdong00(金币+3,VIP+0):我觉得你分析的很对，我做了各种比例的胶，发现胶浓度越大，产生那样的花纹就会越多。谢谢你的意见，我会尝试一下的
dongdong00(金币+3,VIP+0):我觉得你分析的很对，我做了各种比例的胶，发现胶浓度越大，产生那样的花纹就会越多。谢谢你的意见，我会尝试一下的
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从楼主描述的情况看应该是因为胶浓度太大，在胶凝固过程中体积缩小，导致与玻璃板分离所致。 这种情况下，胶一般是可以用的（我们配的胶偶尔出现这样情况，基本无影响） 建议：如果想分离这种目标蛋白，必然要在有限的胶长度上提高分辨率，而提高分辨率的方法不能一味的提高胶浓度。有一种办法是配制正常15%分离胶，但配方中的水用等量的甘油替换，楼主不妨试试，可以达到意想不到的效果。（有什么细节不清楚的，欢迎与我共同探讨）  |
3楼2008-08-01 01:59:23
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