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wyong186

木虫 (正式写手)

[交流] 100金币求助:聚丙烯酰胺凝胶电泳+2008年10月1日

请问:我的实验过程中需要20%的聚丙烯酰胺,那我应该配多大浓度的准备液呢?配比应该是多少呢?一般都采用什么染料呢?谢谢!

[ Last edited by wyong186 on 2008-7-29 at 15:34 ]
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lykk

考马斯亮蓝染~~好象可以
5楼2008-10-21 10:31:27
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明西2004

新虫 (初入文坛)

一般都配成40%的准备液,然后加1XTBE和水进行调配,染色方法很多,有一种我做的觉得效果比较好的染色方法,步骤如下:
1)        洗胶  取出电泳后的聚丙烯酰胺电泳胶,用200mlSterile ddH2O清洗1分钟;
2)固定  用固定液固定6分钟,固定液配制比例为:10%酒精+0.5%冰乙酸(共200ml)染色;
3)染色  用200ml2%AgNO3染色固定后的,12分钟;
4)漂洗  用200mldH2O漂洗染色后的聚丙烯酰胺电泳胶,1分钟;
5)在200ml蒸馏水中加入100μlNa2S2O3除去非还原银,1分钟;
6)显色  在200ml15%NaOH溶液中加入2ml甲醛显色,直到满意为止(4-10分钟);
7)漂洗  用dH2O清洗甲醛-NaOH显色后的聚丙烯酰胺电泳胶,2分钟。
很高兴认识大家
2楼2008-07-29 16:53:19
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界

楼主真是大方呀,呵呵,挥金如土,呵呵
跑多小分子量的蛋白用这么高浓度的PAGE胶??
现在invitrogene公司有一种梯度的成品胶,用起来感觉很好的,适合打蛋白和小蛋白混合跑的情况。
位卑未敢忘忧国。
3楼2008-07-30 07:30:27
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mjl3680

木虫 (小有名气)

配胶不但要看T的百分比,还要看C,
一般T要达到20%,C一般用3%,这是用来分离多肽吧,但分子量太小,小于4000,也挺难的,我最近跑,SIGAMA的超低分子量MARKER,最后两条总出不来,也用了一些办法,但不是很理想.
你配49.5%的原溶液,丙胺28克,甲叉1.5克,定容100ML
分离胶,间隙胶和浓缩胶根据你加的物质不同,量也不同,随便找个文章都有详细的配比.我有些配方,可以EMAIL我.
4楼2008-10-01 12:12:05
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