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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 100金币求助：聚丙烯酰胺凝胶电泳+2008年10月1日
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wyong186

木虫 (正式写手)

[交流] 100金币求助：聚丙烯酰胺凝胶电泳+2008年10月1日

请问:我的实验过程中需要20%的聚丙烯酰胺，那我应该配多大浓度的准备液呢？配比应该是多少呢？一般都采用什么染料呢？谢谢！

[ Last edited by wyong186 on 2008-7-29 at 15:34 ]
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1楼 2008-07-29 15:25:52
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明西2004

新虫 (初入文坛)
一般都配成40%的准备液，然后加1XTBE和水进行调配，染色方法很多，有一种我做的觉得效果比较好的染色方法，步骤如下：
1)        洗胶  取出电泳后的聚丙烯酰胺电泳胶，用200mlSterile ddH2O清洗1分钟；
2）固定  用固定液固定6分钟，固定液配制比例为：10%酒精+0.5%冰乙酸（共200ml)染色；
3）染色  用200ml2%AgNO3染色固定后的，12分钟；
4）漂洗  用200mldH2O漂洗染色后的聚丙烯酰胺电泳胶，1分钟；
5）在200ml蒸馏水中加入100μlNa2S2O3除去非还原银，1分钟；
6）显色  在200ml15%NaOH溶液中加入2ml甲醛显色,直到满意为止（4-10分钟）；
7）漂洗  用dH2O清洗甲醛-NaOH显色后的聚丙烯酰胺电泳胶，2分钟。
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很高兴认识大家
2楼2008-07-29 16:53:19
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界
楼主真是大方呀，呵呵，挥金如土，呵呵
跑多小分子量的蛋白用这么高浓度的PAGE胶？？
现在invitrogene公司有一种梯度的成品胶，用起来感觉很好的，适合打蛋白和小蛋白混合跑的情况。
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位卑未敢忘忧国。
3楼2008-07-30 07:30:27
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mjl3680

木虫 (小有名气)
配胶不但要看Ｔ的百分比，还要看Ｃ，
一般Ｔ要达到２０％，Ｃ一般用３％，这是用来分离多肽吧，但分子量太小，小于４０００，也挺难的，我最近跑，ＳＩＧＡＭＡ的超低分子量ＭＡＲＫＥＲ，最后两条总出不来，也用了一些办法，但不是很理想．
你配４９．５％的原溶液，丙胺２８克，甲叉１．５克，定容１００ＭＬ
分离胶，间隙胶和浓缩胶根据你加的物质不同，量也不同，随便找个文章都有详细的配比．我有些配方，可以ＥＭＡＩＬ我．
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4楼2008-10-01 12:12:05
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lykk

考马斯亮蓝染～～好象可以
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5楼2008-10-21 10:31:27
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amberking

0.5

一般都是40%的，操作和配方都参照分子克隆吧
有银子可以买现成的胶
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6楼2008-10-23 14:45:05
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lvy82

铁虫 (初入文坛)
也可以参照 北京鼎国生物科技的 银染试剂盒里的银染方法来进行染色

里面的药品都是常规药品 很好用

另外，2楼的染色方法也不错 其用量在用的时候可以略为的多加一些  染出的效果可能会更好些
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中科院动物所在读博士
7楼2008-11-26 11:52:21
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guxinhan123

银虫 (正式写手)
考马斯亮蓝R250
考马斯亮蓝G250
上样量小用银染，具体方法可以参考文献
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8楼2008-12-02 10:12:22
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hnanxxl

金虫 (正式写手)
不明确要做什么试验，是跑酶（蛋白）还是跑DNA？目的不同，染色方法当然不同了。配方可以参考何忠效，张树政所编写的《电泳》。
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9楼2008-12-03 11:26:46
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