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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » FA修饰的BSA 金纳簇进不去细胞
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禾泽2010

新虫 (正式写手)

[求助] FA修饰的BSA 金纳簇进不去细胞 已有1人参与

文献中有说用BSA 修饰的金纳簇可以进入细胞，可是为什么我重复了那么多次都木有做出来。提前一天种板，10万cell/ml ,第二天加用培养基稀释的BSA修饰的金纳簇，1mM，2-6个小时后用荧光倒置显微镜测，观察不到荧光。又看到文献说用FA修饰BSA金纳簇可以更容易的进去，可是还是重复不出来文献中的结果，测不到荧光。到底是什么原因。难道加药的时候要再加其他什么东西吗，金纳簇就是进不去细胞.有木有做过类似实验的求指点一下!!!
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1楼 2015-06-16 11:24:45
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zp199

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 禾泽2010 at 2015-06-16 15:41:32
用的是hela细胞，表面有过表达的叶酸受体。实验中有做对照培养基中加FBS和不加FBS。可是还是木有荧光。不知道到底是哪一步有问题还是什么细节没有注意到...

这么看你的操作是没有问题的，那你得考察一下加入BSA-Au cluster的量了，是不是加入量太少，在倒置荧光显微镜下看不到，建议用confocal看看，还有，激发光和发射接收范围要设置对
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4楼2015-06-16 17:41:40
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zp199

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
禾泽2010: 金币+2 2015-06-16 15:39:26
lz首先要确定用的是什么细胞系，该细胞系是否高度表达叶酸受体，还有就是，孵育时间2-6小时的话，培养基中是否加入了胎牛血清，建议不加。然后再试试看
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2楼2015-06-16 15:08:17
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禾泽2010

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zp199 at 2015-06-16 15:08:17
lz首先要确定用的是什么细胞系，该细胞系是否高度表达叶酸受体，还有就是，孵育时间2-6小时的话，培养基中是否加入了胎牛血清，建议不加。然后再试试看

用的是hela细胞，表面有过表达的叶酸受体。实验中有做对照培养基中加FBS和不加FBS。可是还是木有荧光。不知道到底是哪一步有问题还是什么细节没有注意到
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3楼2015-06-16 15:41:32
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禾泽2010

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zp199 at 2015-06-16 17:41:40
这么看你的操作是没有问题的，那你得考察一下加入BSA-Au cluster的量了，是不是加入量太少，在倒置荧光显微镜下看不到，建议用confocal看看，还有，激发光和发射接收范围要设置对...

我们的浓度比文献中的都高，我们实验室之后荧光倒置，呜呜。曝光时间测了400ms-1.5s，可是都木有荧光。一直做不出来，也没有办法向老板证明不是操作问题
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5楼2015-06-16 17:54:12
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