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左眼

金虫 (小有名气)

[求助] 用akta分子筛置换buffer 已有1人参与

第一次做的时候,用tris buffer 过完ni sepharose之后,得到的蛋白用akta分离,tris buffer做running buffer 得到的结果是图一
后来实验的时候,用tris buffer 过完ni sepharose后,用PBS做running buffer 在akta上分离,结果如图2
我想问下这个差别是正常的吗?不同buffer 的话跑sds-page的位置会不一样?还是根本就不是一个蛋白?
因为师姐说过ni sepharose一般都用tris, 不知道大家怎么弄的。
marker 是一样的 我还两个放在一个胶上跑 感觉位置是不太一样

用akta分子筛置换buffer
图1.JPG


用akta分子筛置换buffer-1
图2.JPG
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左眼

金虫 (小有名气)

因为我是新手,望大神多多赐教,非常感谢。
3楼2015-06-12 17:26:11
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左眼

金虫 (小有名气)

蛋白分子量68800左右
2楼2015-06-12 17:25:27
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左眼

金虫 (小有名气)

上错图了 图二是第二次做的时候在ni柱上看到的图 感觉这个时候分子量就不是很一样 感觉很奇怪
4楼2015-06-12 17:54:32
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

为什么你两张图标记出来的蛋白纯度差那么多呢?按理说相同条件下来的蛋白纯度应该差不多才对。
另外不同的buffer对于蛋白的折叠不一样,蛋白构象不同,在做非还原SDS时候是有可能造成位置不一样的情况。只要在marker附近,就差不多了。比较SDS的方法也不精确。
5楼2015-08-17 16:25:49
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