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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 黑曲霉电转的问题
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yb494546440

金虫 (初入文坛)

[求助] 黑曲霉电转的问题 已有1人参与

求助各位大神， 我最近在做黑曲霉的转化，质粒有1万左右的bp，先做了几次原生质体PEG介导转化，没长出来，然后就参照了王正祥的《黑曲霉电转化条件的研究》和一篇英文文献《Transformation of Intact Aspergillus niger by Electroporation》，单菌落长的很正常，做了菌落PCR对抗性基因进行验证也没问题，但是再传一代再做菌落PCR就P不出来了，难道是菌种的问题，造成质粒丢失？菌株是诱变过的，实验室也从来没做过丝状真菌的分子操作，只能一点点摸索，不知道还有哪些要注意的地方，十分感谢！
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1楼 2015-06-12 09:57:45
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花落已季末

银虫 (小有名气)
你好，我最近也在做黑曲霉转化，请问你用的黑曲霉菌种是哪一个？
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流年似水，看不透的是红尘中镜花水月；往事如烟，挥不去的是岁月荏苒一过往；待得繁华落尽，只余回忆。
2楼2015-10-21 16:50:12
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jean_liang

金虫 (小有名气)

炉中小鸟
您可以查一下REMI转化，挺有效率的，另外，请问您是用的什么质粒呢？是做过表达还是敲除呀？我最近也要做霉菌的过表达，能相互帮助一下吗？另，祝你顺利
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天地为炉，世间万物，冥冥众生，谁不是在苦苦煎熬？！
3楼2015-10-26 12:16:18
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花落已季末

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jean_liang at 2015-10-26 12:16:18
您可以查一下REMI转化，挺有效率的，另外，请问您是用的什么质粒呢？是做过表达还是敲除呀？我最近也要做霉菌的过表达，能相互帮助一下吗？另，祝你顺利

您好，能否分享一下有关这方面的资料和经验？
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流年似水，看不透的是红尘中镜花水月；往事如烟，挥不去的是岁月荏苒一过往；待得繁华落尽，只余回忆。
4楼2016-11-14 10:57:01
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道格森

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jean_liang at 2015-10-26 12:16:18
您可以查一下REMI转化，挺有效率的，另外，请问您是用的什么质粒呢？是做过表达还是敲除呀？我最近也要做霉菌的过表达，能相互帮助一下吗？另，祝你顺利

您好，我现在也在做黑曲霉的表达。用的农杆菌法，目的基因可以转化到黑曲霉中，但是不表达，比较头疼，想换一种转化方法。
希望可以交流一下。
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5楼2018-04-18 11:24:08
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王徐萍

新虫 (初入文坛)
★ ★
渊博震天: 金币-2, 应助指数-1, 无实质性应助，请勿点击应助回帖 2018-09-03 07:30:07
您好，想问一下真菌菌落PCR的条件？怎么可以p出条带呢？
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6楼2018-09-02 21:24:20
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