应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酶连
51/1返回列表
查看: 1438  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xh446063

新虫 (小有名气)

[求助] 酶连 已有3人参与

请教各位

      我最近在用TAKARA的T4 DNA连接酶做载体（6.5kb）和目的片段（0.5kb）的连接，但是翻看了一下说明书，没有推荐反应体系，不知道怎样的配比才能提高连接效率，请各位指点迷津，另外大家都在用什么反应条件，我看有37℃，16℃和4℃，哪个方法高效快捷呢？谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-06-11 14:58:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ultimica

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xh446063: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-19 19:16:48
我个人常用的连接体系如下：
目的片段酶切产物           6微升
质粒载体酶切产物           2微升
ddH2O                         4微升
T4 连接酶10X Buffer    1.5微升
T4 连接酶                   1.5微升
其中可根据测的目的片段和质粒载体酶切产物的浓度调整摩尔体积，总比例为载体：目的片段=1:3~1:9，和楼上推荐的基本没差，其余用水补全，共计15微升体系，16℃水浴连接过夜，望采纳。
赞一下 回复此楼
3楼2015-06-16 10:26:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xh446063: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-19 19:15:30
将载体和目的片段都提取好之后测浓度，两种的摩尔比1:3-1:10直接都可以，连接温度16度的效果可能比较好一点
赞一下 回复此楼
医学&统计学
2楼2015-06-14 13:23:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

露露琦琦

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xh446063: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-19 19:16:54
体系跟 楼上都差不多啦，不过我一般都是室温2小时后转化，效果不错。
赞一下 回复此楼
4楼2015-06-16 10:28:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xh446063

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2015-06-14 13:23:01
将载体和目的片段都提取好之后测浓度，两种的摩尔比1:3-1:10直接都可以，连接温度16度的效果可能比较好一点

谢谢您的回复，我要再调整一下我的反应体系
赞一下 回复此楼
5楼2015-06-19 19:17:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 292求调剂 +5 yhk_819 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:38 by 公瑾逍遥
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +3 wsl111 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:38 by ms629
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 材料学硕318求调剂 +9 February_Feb 2026-03-01 11/550 2026-03-01 19:47 by 无懈可击111
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 0857调剂 +3 一ll半 2026-02-28 3/150 2026-03-01 18:32 by 热情沙漠
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭