应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酶连
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1497  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xh446063

新虫 (小有名气)

[求助] 酶连 已有3人参与

请教各位

      我最近在用TAKARA的T4 DNA连接酶做载体（6.5kb）和目的片段（0.5kb）的连接，但是翻看了一下说明书，没有推荐反应体系，不知道怎样的配比才能提高连接效率，请各位指点迷津，另外大家都在用什么反应条件，我看有37℃，16℃和4℃，哪个方法高效快捷呢？谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-06-11 14:58:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ultimica

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xh446063: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-19 19:16:48
我个人常用的连接体系如下：
目的片段酶切产物           6微升
质粒载体酶切产物           2微升
ddH2O                         4微升
T4 连接酶10X Buffer    1.5微升
T4 连接酶                   1.5微升
其中可根据测的目的片段和质粒载体酶切产物的浓度调整摩尔体积，总比例为载体：目的片段=1:3~1:9，和楼上推荐的基本没差，其余用水补全，共计15微升体系，16℃水浴连接过夜，望采纳。
赞一下 回复此楼
3楼2015-06-16 10:26:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xh446063: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-19 19:15:30
将载体和目的片段都提取好之后测浓度，两种的摩尔比1:3-1:10直接都可以，连接温度16度的效果可能比较好一点
赞一下 回复此楼
医学&统计学
2楼2015-06-14 13:23:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

露露琦琦

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xh446063: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-19 19:16:54
体系跟 楼上都差不多啦，不过我一般都是室温2小时后转化，效果不错。
赞一下 回复此楼
4楼2015-06-16 10:28:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xh446063

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2015-06-14 13:23:01
将载体和目的片段都提取好之后测浓度，两种的摩尔比1:3-1:10直接都可以，连接温度16度的效果可能比较好一点

谢谢您的回复，我要再调整一下我的反应体系
赞一下 回复此楼
5楼2015-06-19 19:17:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料考研调剂 +3 Gs大王 2026-04-02 3/150 2026-04-02 00:34 by 2026材料调剂
[考研] 266求调剂 +7 阳阳哇塞 2026-04-01 7/350 2026-04-01 22:27 by barlinike
[考研] 材料科学与工程调剂 +16 深V宿舍吧 2026-03-30 17/850 2026-04-01 21:00 by 赖春艳
[考研] 085601材料工程找调剂 +20 oatmealR 2026-03-29 21/1050 2026-04-01 21:00 by lijunpoly
[考研] 材料0856 英一数二 323 求调剂 +9 袁sy 2026-04-01 9/450 2026-04-01 14:30 by wangjy2002
[考研] 0856调剂 +7 曲听筠 2026-03-30 7/350 2026-04-01 08:51 by JourneyLucky
[考研] 08开头看过来！！！ +3 wwwwffffff 2026-03-31 5/250 2026-03-31 17:45 by 星光/
[考研] 318求调剂 +10 陈晨79 2026-03-30 10/500 2026-03-31 17:37 by 544594351
[考研] 求调剂 生物学 377分 +6 zzll03 2026-03-31 6/300 2026-03-31 17:33 by 唐沐儿
[考研] 286求调剂 +6 Faune 2026-03-30 6/300 2026-03-31 14:37 by jp9609
[考研] 276求调剂 +3 赵久华 2026-03-29 3/150 2026-03-31 10:06 by cal0306
[考研] 求调剂 +7 青春裁为三截 2026-03-29 7/350 2026-03-30 13:14 by laoshidan
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +6 niko- 2026-03-27 6/300 2026-03-30 10:25 by herarysara
[考研] 291求调剂 +5 Y-cap 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:18 by mumin1990
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-03-26 6/300 2026-03-29 01:11 by hanserlol
[考研] 394求调剂 +3 好事多磨静候佳� 2026-03-26 5/250 2026-03-28 14:24 by 唐沐儿
[考研] 352分 化工与材料 +5 海纳百川Ly 2026-03-27 5/250 2026-03-28 03:39 by fmesaito
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 315调剂 +4 0860求调剂 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:23 by wangjy2002
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭